一种新型转铁蛋白受体结合肽的筛选与鉴定
徐单单1
黄亚东2
张齐好2
苏志坚2
许华1
郑青1
1.暨南大学药学院,广州,5106322.暨南大学医药生物技术研究开发中心
摘要：目的 以转铁蛋白受体(TfR)为靶标,从噬菌体随机七肽库淘选TfR结合肽并进行鉴定.方法 经过三轮筛选,从平板上挑取分隔良好的特异性TfR结合肽单克隆,采用ELISA初步鉴定后行扩增测序及多肽合成,采用流式细胞仪检测人肝癌HepG2细胞表面TfR表达、采用免疫荧光实验及激光共聚焦实验行噬菌体与细胞共定位 鉴定、采用短肽-噬菌体竞争抑制实验检测短肽对噬菌体的竞争抑制率,以正常肝脏L-O2细胞为对照.结果 特异性TfR结合肽克隆最终富集度达80倍；初步检测到20个阳性克隆,其中9号克隆对TfR亲和力最高,测序表明其展示短肽序列为AHLHNRS,以碱性氨基酸为主,经HPLC检测纯度为99.91％；HepG2细胞表面TfR表达显著高于L-O2细胞；免疫荧光实验及激光共聚焦实验均显示9号噬菌体(P9)出现在HepG2细胞表面,而对照L-O2细胞无此现象；短肽与噬菌体P9对TfR的结合存在竞争关系,并且呈浓度依赖性,而野生型噬菌体M13与L-O2不存在此现象.结论 本研究获得一条与TfR具有特异性结合能力的TfR结合肽；此为进一步构建肿瘤和脑源性疾病靶向治疗药物奠定了基础.
关键词：转铁蛋白受体多肽噬菌体展示肽库HepG2细胞
分类号：R730.54(一般性问题)
资助基金：广州市科技计划(2010Y1-C541)
论文发表日期：2012-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 15-18 )
英文信息