大鼠PAX2真核表达质粒构建及瞬时转染肾小管上皮细胞模型建立
李里1
吴玉斌2
宫亮3
1.辽宁医学院附属第一医院,辽宁锦州121000;中国医科大学附属盛京医院2.中国医科大学附属盛京医院3.辽宁医学院附属第一医院,辽宁锦州,121000
摘要：目的 为进一步研究核转录因子(PAX2)对肾小管上皮细胞的转分化调控机制提供依据.方法 真核表达质粒( PGC-FU) -PAX2真核表达质粒的构建:设计PAX2的引物,PCR法从单侧输尿管结扎大鼠肾脏中扩增出目的片段,酶切后定向连入PGC-FU载体,将该重组质粒转化到Ecoli感受态细胞中,通过氨苄青霉素抗药性筛选出成功转化的阳性克隆,并进行扩增；通过PCR及基因测序检测其构建的正确性；PGC-FU-PAX2瞬时转染肾小管上皮细胞模型的建立:脂质体转染法将重组质粒转入肾小管上皮细胞(NRK52E细胞),RT-PCR法、Western blot法分别检测NRK52E细胞PAX2基因、蛋白表达水平,确认PAX2基因的高表达.结果 RT-PCR法成功克隆大鼠PAX2基因,PCR扩增的片段长度为1 294 bp,含有重组质粒的阳性克隆菌液PCR扩增片段约为408 bp,其基因测序结果显示与预期片段大小一致,目的基因与预期基因序列的同源性为100％,说明PGC-FU-PAX2真核表达质粒构建成功.NRK52E转染的PGC-FU-PAX2质粒能够高表达PAX2,呈现绿色荧光,空载组和对照组NRK52E均未见PAX2高表达.结论 成功构建了真核表达载体PGC-FU-PAX2,建立了PAX2高表达肾小管上皮细胞模型,为PAX2对肾小管上皮细胞的转分化作用机制的研究奠定了实验基础.
关键词：核转录因子真核表达质粒肾小管上皮细胞
分类号：Q782(基因工程（遗传工程）)
资助基金：沈阳市科技计划(F10-205-1-29)
论文发表日期：2012-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 35-38 )