人miR-205真核表达载体的构建及鉴定
吴义高1
肖戈1
徐文清1
黄福1
胡卫列2
王尉2
1.南方医科大学研究生学院,广州,5105152.广州军区广州总医院泌尿外科研究所
摘要：目的 构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-miR-205,并使其在肾上腺皮质癌细胞SW-13中稳定表达.方法 依据miRbase数据库中pre-miR-205序列设计引物,PCR扩增pre-miR-205基因并将其克隆至线性化的pcDNA3.1(+)质粒中,获得重组表达载体pcDNA3.1(+)-miR-205,经双酶切及测序分析后,将其及对照空载体转染肾上腺皮质癌SW-13细胞,采用实时定量RCR法鉴定miR-205在SW-13细胞中表达.结果 酶切和测序结果均证实pcDNA3.1(+)-205重组质粒构建成功,经实时定量RCR检测表明转染pcDNA3.1(+)-205的SW-13细胞中miR-205阳性高表达.结论 真核表达载体pcDNA3.1(+)-205在SW-13中稳定转染,为进一步研究miR-205在肾上腺皮质癌细胞SW-13中的功能及基因调控机制奠定了实验基础.
关键词：肾上腺皮质肿瘤微小RNA真核表达载体miR-205
分类号：R736.6(内分泌腺肿瘤)
资助基金：国家自然科学基金(81172421)国家自然科学基金(81001142)
论文发表日期：2012-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 20-22,封2 )
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