人SUMO病毒载体构建及稳转神经母细胞瘤SHSY5Y细胞系的建立
常晶
陆菡
薛庆生
于布为
1.上海交通大学医学院附属瑞金医院,上海,2000252.上海交通大学医学院附属瑞金医院,上海,2000253.上海交通大学医学院附属瑞金医院,上海,2000254.上海交通大学医学院附属瑞金医院,上海,200025
摘要：目的 构建表达人小泛素化相关修饰蛋白(SUMO)基因的逆转录病毒载体,并观察其稳定感染神经母细胞瘤SHSY5Y细胞后SUMO蛋白的表达情况.方法 用EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切peDNA 3.0-HA-SUMO1、pcDNA 3.0-HA-SUMO2、pcDNA3.0-HA-SUMO3质粒,得到3×Flag-SUMOs基因的编码序列,定向插入到pBabe-puro载体中,经扩增、筛选阳性克隆、酶切和测序验证后,转染293T细胞进行病毒包装、扩增、纯化获取逆转录病毒颗粒.将逆转录病毒颗粒感染SHSY5Y细胞,经嘌呤霉素筛选后抗性克隆集落长出.Western blot检测稳定转染的pBabe-3 ×Flag-SUMOs-SHSY5Y单克隆细胞SUMO1～3的表达.结果 pBabe-3×Flag-SUMOs-puro质粒构建正确.稳定转染的SHSY5Y细胞系3×Flag-SUMOs表达明显增强.结论 成功构建了稳定表达SUMO的pBabe-3 × Flag-SUMOs-SHSY5Y细胞系.
关键词：小泛素化相关修饰蛋白逆转录病毒神经母细胞瘤细胞
分类号：R329.2(人体形态学)
资助基金：国家自然科学基金(81102513)国家自然科学基金(81072703)
论文发表日期：2013-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 1-3 )
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