双启动子shRNA干扰的协同效应
崔文静
张矫
马祥敏
王雯雯
王欣
1.天津医科大学附属肿瘤医院,乳腺癌防治教育部重点实验室,天津市肿瘤防治重点实验室,天津 3000602.天津医科大学附属肿瘤医院,乳腺癌防治教育部重点实验室,天津市肿瘤防治重点实验室,天津 3000603.天津医科大学附属肿瘤医院,乳腺癌防治教育部重点实验室,天津市肿瘤防治重点实验室,天津 3000604.天津医科大学附属肿瘤医院,乳腺癌防治教育部重点实验室,天津市肿瘤防治重点实验室,天津 3000605.天津医科大学附属肿瘤医院,乳腺癌防治教育部重点实验室,天津市肿瘤防治重点实验室,天津 300060
摘要：目的 构建含有两段不同靶特异干扰序列的双启动子shRNA载体,并比较其与单个靶特异干扰序列的shRNA载体的干扰效应.方法 通过PCR方法扩增H1启动子序列,构建含有U6和H1双启动子的shRNA载体,命名为PLKO.1-H1.设计2对针对EGFP基因不同位点的shRNA片段,同时设计2对无干扰作用的片段shS1和shS2作为对照.分别构建携带上述片段的慢病毒表达载体shEGFP1-H1-shS2、shS1-H1-shEGFP2及shEGFP1-H1-shEGFP2,同时以shS1-H1-shS2质粒作为对照.将重组质粒转染293t细胞,收集病毒感染Hela/EGFP细胞.比较各组之间细胞的荧光强度,并以Western blot检测EGFP的蛋白表达情况.结果 成功构建含有双启动子的shRNA慢病毒表达载体.实验组与对照组相比,EGFP蛋白表达水平明显下调,以shEGFP1-H1-shEGFP2重组质粒干扰效应最强.结论 含有两段不同靶特异干扰序列的双启动子shRNA载体存在协同干扰效应.
关键词：双启动子RNA干扰协同效应
分类号：Q81(生物工程学(生物技术))
论文发表日期：2013-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 25-28 )