Npu DnaE内含肽构建及其对293T细胞高效反式剪接活性分析
张矫
崔文静
马祥敏
王雯雯
王欣
1.天津医科大学附属肿瘤医院,乳腺癌防治教育部重点实验室,天津市肿瘤防治重点实验室,天津 3000602.天津医科大学附属肿瘤医院,乳腺癌防治教育部重点实验室,天津市肿瘤防治重点实验室,天津 3000603.天津医科大学附属肿瘤医院,乳腺癌防治教育部重点实验室,天津市肿瘤防治重点实验室,天津 3000604.天津医科大学附属肿瘤医院,乳腺癌防治教育部重点实验室,天津市肿瘤防治重点实验室,天津 3000605.天津医科大学附属肿瘤医院,乳腺癌防治教育部重点实验室,天津市肿瘤防治重点实验室,天津 300060
摘要：目的 构建Npu DnaE内含肽,探讨Npu DnaE内含肽是否在293T细胞中具备高效反式剪接活性.方法 制备融合基因Vn-NDn-myc和NDc-Vc,插入pCDH-CMV-MCS-EFl-Puro载体,构建质粒.转染293T细胞,荧光显微镜下观察目的蛋白Venus是否形成.48 h后收集细胞蛋白,应用Western blot技术进一步印证.结果 构建的质粒经限制性内切酶鉴定及测序比对正确,转染293T后可见共转染细胞组出现明亮荧光,弥漫分布于细胞质中,Western blot证明高量目的蛋白Venus形成.结论 成功构建Npu DnaE内含肽,其能在293T细胞中发挥反式剪接的生物学功能,并具有高效的剪接效率及功能目的蛋白形成率.
关键词：Npu DnaE内含肽蛋白质反式剪接
分类号：R34(基础医学)
资助基金：天津市高等学校科技发展基金计划项目(20090139)
论文发表日期：2013-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 10-13,后插1 )
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