LV3-KiSS1-miRNA 的构建及其在体内外沉默效应观察
董红1
李嫔2
1.中山大学孙逸仙纪念医院,广州,5101202.上海交通大学附属儿童医院
摘要：目的：构建靶向KiSS1基因的miRNA慢病毒质粒（LV3-KiSS1-miRNA），并观察其在人胚肾293T细胞及SD大鼠体内的沉默效应。方法利用四质粒系统合成LV3-KiSS1-miRNA，分别用LV3-KiSS1-miRNA （观察组）、LV3-N-miRNA （对照病毒组）、细胞培养液（空白对照组）与 KiSS1的真核表达载体pcDNA3．1（＋）-KiSS1共转染293T细胞，72 h后采用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白（ GFP）阳性表达率，RT-PCR法检测细胞中的KiSS1 mRNA。将90只21日龄SD大鼠随机分为3组各30只，分别侧脑室注射LV3-KiSS1-miRNA（干扰病毒组）、LV3-N-miRNA （对照病毒组）和生理盐水（生理盐水组）40μL，采用RT-PCT法检测30、35、45日龄时大鼠下丘脑组织中的KiSS1 mRNA。结果空白对照组中无GFP表达，而观察组与对照病毒组的GFP表达率分别为89．4％、94．2％。观察组与对照病毒组、空白对照组比较KiSS1 mRNA表达量减少（P均＜0．01），沉默效率达到86％；对照病毒组与空白对照组比较，P＞0．05。干扰病毒组大鼠各日龄时下丘脑组织中KiSS1 mRNA表达水平明显低于生理盐水组和对照病毒组（P均＜0．05）。结论成功构建LV3-KiSS1-miRNA，并能高效、稳定地抑制293T细胞及SD大鼠下丘脑组织中KiSS1 miRNA的表达。
关键词：性发育KiSS1基因基因干扰技术微小核糖核酸慢病毒载体大鼠
分类号：R725.8(小儿内科学)
论文发表日期：2015-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 28-30 )