小鼠骨髓来源调节性树突状细胞的体外诱导分化及鉴定
王进京
袁晶华
乔磊
刘义
张晓宁
李克秋
李光
1.天津医科大学基础医学院,天津,3000702.天津医科大学基础医学院,天津,3000703.天津医科大学基础医学院,天津,3000704.天津医科大学基础医学院,天津,3000705.天津医科大学基础医学院,天津,3000706.天津医科大学基础医学院,天津,3000707.天津医科大学基础医学院,天津,300070
摘要：目的 建立小鼠骨髓来源调节性树突状细胞(DCreg)体外诱导培养和扩增的方法,并进行生物学及功能鉴定.方法 取小鼠骨髓单个核细胞(BM-MNCs),用重组小鼠白细胞介素4(rmIL-4)及重组小鼠粒-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)诱导分化,第6天细胞中含大量DCreg;取部分细胞加脂多糖(LPS),继续培养2 d(第8天)分化为成熟DC(mDC).观察培养过程中细胞形态变化,流式细胞术检测DCreg特异性表面分子CD11b和共刺激分子CD40、CD86.取小鼠脾脏分离的CD8+T细胞,随机分为3组;A、B组将细胞分别与DCreg、mDC以5:1、10:1、20:1混合培养4 d,C组细胞不处理.采用CFSE标记法检测CD8+T细胞增殖情况,Real-time PCR检测CD8+T细胞免疫功能分子穿孔素(Prf1)和颗粒酶B(GzmB)mRNA.结果 新分离的BM-MNCs呈圆形,体积较小;诱导第6天细胞集落数量增多,体积增大,细胞表面突起增多,CD11b阳性细胞比例达96.1%±2.7%.与mDC相比,DCreg中CD40、CD86表达阳性率降低(P均<0.05).与B组比较,A组细胞增殖率降低(P均<0.05);与B、C组比较,A组Prf1、GzmB mRNA表达量降低(P均<0.05),与C组比较,B组GzmB mRNA表达量升高(P均<0.05).结论 rmGM-CSF联合rmIL-4可成功诱导小鼠BM-MNCs向DCreg分化,且纯度高,并具有免疫抑制功能.
关键词：调节性树突状细胞器官移植免疫耐受细胞培养穿孔素颗粒酶B
分类号：R392.4(医学免疫学)
资助基金：国家高技术研究发展计划项目(2012AA021003)
论文发表日期：2016-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 13-16 )
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