慢病毒介导干扰 LSD1基因的卵巢癌稳转细胞株的构建及鉴定
万晓蕾1
赖文升2
邵根宝2
李袁霞2
刘秀雯2
金洁2
吴朝阳3
1.江苏大学附属人民医院，江苏镇江212002; 江苏大学医学院2.江苏大学医学院3.江苏大学附属人民医院,江苏镇江,212002
摘要：目的：构建并鉴定慢病毒介导干扰赖氨酸特异性去甲基化酶1（ LSD1）基因的卵巢癌稳转细胞株，为深入研究以LSD1为靶点的表观遗传学抗肿瘤治疗奠定基础。方法扩增并抽提所需质粒，紫外分光光度计检测质粒纯度，计算A260／A280。采用Lipofectamine 2000脂质体转染法将质粒转染入人肾上皮细胞293T，取转染THM质粒后的293T细胞，在倒置荧光显微镜下观察转染情况；分别取转染目的质粒和PLKO空载体质粒后的293T细胞，收集病毒上清液，感染人卵巢癌SKOV3细胞（分别记为观察组和对照组），筛选出稳转细胞株。观察组经浓度梯度（0、1、10、100、1000 ng／mL）多西环素诱导，以及两组均经100 ng／mL多西环素诱导后，采用Western blotting法检测LSD1及其特异性反应底物H3K4me1、H3K4me2蛋白相对表达量。结果目的质粒A260／A280在2．0左右，说明纯度较高；THM质粒转染293T细胞呈绿色荧光，为真核载体表达的绿色荧光蛋白，表明成功转染。随着多西环素浓度的升高，观察组诱导后LSD1蛋白相对表达量均逐渐降低，H3K4me1、H3K4me2蛋白相对表达量逐渐升高，各浓度间比较有统计学差异（P均＜0．01）。观察组经100 ng／mL多西环素诱导后LSD1蛋白相对表达量均明显低于同组诱导前及对照组诱导后，H3K4me1、H3K4me2蛋白相对表达量明显高于同组诱导前及对照组诱导后（P均＜0．01）。结论成功构建慢病毒干扰下调LSD1基因表达的卵巢癌稳转细胞株，并经不同浓度多西环素诱导鉴定；该细胞株可用于以LSD1为靶点的表观遗传学抗肿瘤治疗研究。
关键词：赖氨酸特异性去甲基化酶1RNA干扰人卵巢癌SKOV3细胞稳转细胞株
分类号：R737.31(泌尿生殖器肿瘤)
资助基金：国家自然科学基金(81170573)
论文发表日期：2016-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 19-22 )
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