脂质体转染法与电转染法在丙型肝炎病毒RNA 转染人肝癌细胞中的应用效果比较
卢莎1
谭文杰2
张玲2
邓瑶2
陶格斯1
蔡敏3
李恋3
沈晓玲3
1.内蒙古医科大学，呼和浩特010110; 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所2.中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所3.内蒙古医科大学,呼和浩特,010110
摘要：目的：比较脂质体转染法与电转染法在丙型肝炎病毒（ HCV ） RNA转染人肝癌细胞中的应用效果。方法培养人肝癌细胞Huh7．5-CD81并分为A、B组及对照组。 A组采用电转染质粒pHebei（E1E2）／JFH1来源的HCV RNA；B组采用脂质体转染质粒pHebei（E1E2）／JFH1来源的HCV RNA；对照组采用脂质体转染复制缺陷质粒pJFH1／GND转录获得的HCV RNA。光学显微镜下观察各组转染后细胞形态，采用免疫荧光法（ IFA）检测三组转染效率，real-time PCR法检测三组细胞培养液上清中的HCV RNA，采用TCID50法检测A、B组细胞培养液上清中的丙型肝炎病毒（HCVcc）感染滴度。结果 A组转染使用细胞数为1×106，转染后第2天细胞损伤过半，边缘毛糙；B组转染使用细胞数为2×105，转染后第2天细胞基本无损伤。 A组转染效率为9．98％±0．83％，B组转染效率为2．58％±0．39％，两组转染效率相比，P＜0．01；对照组未检出荧光阳性细胞。 A、B组转染后细胞培养液上清中HCV RNA拷贝数均呈现先下降后升高的趋势，最终稳定于106 copies／mL。 A组转染后21 d、B组转染后31 d方能检测到HCV感染滴度，A、B组收获HCV最高感染滴度均为104 ffu／mL。结论脂质体转染和电转染两种方法均可建立嵌合HCV的人肝癌细胞培养体系，脂质体转染法对细胞的损伤较小，电转染法转染效率较高、收获HCVcc的时间较短，但两种方法收获的HCVcc感染滴度无明显差异。
关键词：丙型肝炎病毒电穿孔脂质体RNA转染
分类号：R373.9(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
资助基金：国家自然科学基金(81373229)国家科技重大专项(2013ZX10004601)国家科技重大专项(2013ZX10004609)内蒙古医科大学科技百万项目(NY2011BW003)
论文发表日期：2016-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 15-18 )
英文信息