miR-155靶向调控SP1、E2F2 mRNA转录水平的功能验证
赵盼1
刘真2
管静芝2
袁龙2
舒彬2
尹斌2
1.河北北方学院研究生部,河北张家口,0750002.中国人民解放军第309医院
摘要：目的：观察微小RNA155（miR-155）对端粒酶逆转录酶（hTERT）调控相关蛋白特异性蛋白1（SP1）及转录因子E2F2重组质粒表达的影响，为进一步研究miR-155调控肿瘤细胞hTERT表达的机制提供实验基础。方法采用生物信息学预测软件TargetScan和Miranda预测SP1和E2F2 mRNA 3′-UTR是否是人miR-155的作用靶点。针对SP1和E2F2 mRNA 3′-UTR设计互补的两条寡核苷酸，包括目标序列（即SP1、E2F2野生型序列）及突变序列（SP1-mu、E2F2-mu），构建SP1和E2F2 mRNA 3′-UTR报告基因载体pMIR-SP1、pMIR-E2F2、pMIR-SP1-mu和pMIR-E2F2-mu。培养HEK-293细胞，采用脂质体法将SP1和E2F2的野生型和突变型pMIR-Luc质粒共转染HEK-293细胞24 h。将细胞分为SP1空白对照组、SP1目标序列组、SP1突变序列组、E2F2空白对照组、E2F2目标序列组、E2F2突变序列组，均加入0．2μg重组质粒、0．01μg对照质粒和0．375μL寡核苷酸，培养24 h。采用双荧光素酶报告基因系统检测双荧光素酶活性，以萤火虫荧光素酶活性值（F）／海肾荧光素酶活性值（R）比值评价miR-155与SP1及E2F2 mRNA 3′-UTR结合效果。结果在线预测结果示，SP1 mRNA 3′-UTR和E2F2 mRNA 3′-UTR均有与miR-155完全互补配对的序列，确定二者均为miR-155的靶基因。经鉴定，SP1和E2F2报告基因重组质粒构建成功。SP1目标序列组F／R低于SP1空白对照组及SP1突变序列组（P均＜0．05），E2F2目标序列组F／R低于E2F2空白对照组及E2F2突变序列组（P均＜0．05）。结论成功构建了SP1和E2F2报告基因重组质粒，证实miR-155能够靶向结合SP1和E2F2 mRNA 3′-UTR，在转录后水平抑制SP1和E2F2的表达。
关键词：特异性蛋白1E2F2转录因子微小RNA155荧光素酶报告基因人端粒酶逆转录酶质粒
分类号：R730.231(一般性问题)
资助基金：国家自然科学基金(81170329)全军医学科技青年培育项目(15QNP049)中国人民解放军第三〇九医院院管课题(2014MS-001)
论文发表日期：2016-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 35-38 )