融合蛋白anti-CD19(Fab)-CH3的构建及其靶向性观察
查剑英1
张益枝2
卢杨1
杨圆圆1
孔凡妮1
张砚君1
1.中国医学科学院北京协和医学院血液病医院血液学研究所,天津,3000202.新疆克拉玛依中心医院
摘要：目的 构建针对CD19的融合蛋白anti-CD19(Fab)-CH3,并观察其靶向性.方法 采用基因克隆技术,构建基因重组质粒pAZY-anti-CD19(Fab)-CH3,测序鉴定后,转化至大肠杆菌16C9,表达产物经Protein G亲和层析柱纯化后,采用SDS-PAGE电泳Western blotting法鉴定纯化蛋白,用高效液相分子排阻色谱法(HPLC-SEC)检测纯化后蛋白中二聚体的比例.采用流式细胞术检测融合蛋白anti-CD19(Fab)-CH3、anti-CD19(Fab)与CD19+的B系淋巴瘤Raji细胞的结合力,采用竞争免疫荧光结合实验检测融合蛋白anti-CD19(Fab)-CH3、anti-CD19(Fab)作用下亲代鼠源性抗体HIT19a和Raji细胞的结合力.结果 SDS-PAGE电泳和Western blotting法均观察到相对分子质量约65 kDa的蛋白条带,与融合蛋白anti-CD19(Fab)-CH3的分子量相符.纯化后蛋白中二聚体比例约为89%.与anti-CD19(Fab)相比,相同浓度的融合蛋白anti-CD19(Fab)-CH3与Raji细胞的结合能力较高.融合蛋白anti-CD19(Fab)-CH3作用下HIT19a-FITC与Raji 细胞的结合荧光强度低于等浓度的anti-CD19(Fab)作用下HIT19a-FITC与Raji 细胞的结合荧光强度.结论 成功构建并表达融合蛋白 anti-CD19(Fab)-CH3.与单体anti-CD19(Fab)相比,融合蛋白anti-CD19 (Fab)-CH3与CD19+的B淋巴瘤细胞Raji的靶向性较好.
关键词：anti-CD19(Fab)蛋白融合蛋白anti-CD19(Fab)-CH3B淋巴细胞瘤
分类号：R318(医用一般科学)R733(造血器及淋巴系肿瘤)
资助基金：国家自然科学基金(81572993)国家自然科学基金(81400176)科技创新工程项目(2016-I2M-3-013)
论文发表日期：2017-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 39-42 )
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