过表达CUEDC2人脑胶质瘤细胞系U251的构建
唐传喜
刘鑫峰
李风
高殿帅
1.徐州医科大学,江苏徐州,2210042.徐州医科大学,江苏徐州,2210043.徐州医科大学,江苏徐州,2210044.徐州医科大学,江苏徐州,221004
摘要：目的 构建过表达CUE结构域蛋白2(CUEDC2)的人脑胶质瘤U251细胞系.方法 PCR扩增CUEDC2基因全长序列,将其连接于GV358载体质粒.酶切鉴定GV358-CUEDC后采用慢病毒包装三质粒系统(GV358-CUEDC2、Helper 1.0、Helper 2.0)转染293T细胞.转染48、72 h后收集病毒上清并感染U251细胞.将U251细胞分为空白对照组、过表达CUEDC2组、空载体组.空白对照组不进行感染操作,过表达CUEDC2组、空载体组分别感染GV358-CUEDC和GV-vector.流式筛选后采用实时荧光定量PCR法检测U251细胞中的CUEDC2 mRNA,采用Western blotting法检测CUEDC2蛋白.结果 GV358-CUEDC酶切结果显示在900 bp处有一条明显条带,CUEDC2测序结果与GenBank数据库比对完全一致.流式筛选感染GV358-CUEDC慢病毒的U251细胞,得到阳性率95%以上的U251细胞.U251细胞在感染GV358-CUEDC2及GV-vector病毒后荧光显微镜下均可见绿色荧光.空白对照组、空载体组、过表达CUEDC2组U251细胞中CUEDC2 mRNA相对表达量分别为5.290±0.663、0.823±0.059、1,CUEDC2蛋白相对表达量分别为0.48±0.020、0.51±0.015、0.92±0.150,过表达CUEDC2组CUEDC2 mRNA及蛋白相对表达量均高于空载体组和空白对照组(P均<0.01).结论 成功构建了过表达CUEDC2的人脑胶质瘤U251细胞系.
关键词：胶质瘤胶质母细胞瘤CUE结构域蛋白2慢病毒
分类号：R739.41(神经系肿瘤)
论文发表日期：2017-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 1-4 )
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