miR-31慢病毒载体质粒构建及其对宫颈癌HeLa细胞增殖和迁移能力的影响
王琳琳
胡晓霞
刘斐
1.广西壮族自治区人民医院,南宁,5300212.广西壮族自治区人民医院,南宁,5300213.广西壮族自治区人民医院,南宁,530021
摘要：目的 构建微小核糖核酸31(miR-31)慢病毒载体质粒,并观察其对宫颈癌HeLa细胞增殖和迁移能力的影响.方法 以包含miR-31基因的序列为目的片段,设计末端含有相应酶切位点的引物,PCR扩增目的片段,产物双酶切后插入线性化慢病毒载体中,构建miR-31慢病毒载体质粒并鉴定.将miR-31慢病毒载体质粒与包装质粒pPACKH1-GAG、pPACKH1-REV、pVSV-G共转染宫颈癌HeLa细胞,并进行慢病毒包装,检测miR-31慢病毒载体质粒滴度.取对数生长期HeLa细胞,随机分为空白对照组、miR-31组、空载体组,空白对照组不做任何处理,miR-31组予miR-31慢病毒载体质粒处理,空载体组予空载体慢病毒质粒处理.采用实时荧光定量PCR法检测各组miR-31 mRNA表达;MTT法和细胞克隆实验检测各组细胞增殖能力,Transwell小室法检测各组细胞迁移能力.结果 成功构建重组慢病毒表达质粒,其病毒滴度为3×107 TU/mL.miR-31组miR-31 mRNA相对表达量明显高于空白对照组、空载体组(P均<0.05),而空白对照组与空载体组比较P>0.05.miR-31组细胞增殖和迁移能力均高于空白对照组、空载体组(P均<0.05),而空白对照组与空载体组比较P均>0.05.结论 成功构建了miR-31慢病毒载体质粒,建立了稳定过表达miR-31的宫颈癌HeLa细胞.稳定过表达miR-31的宫颈癌HeLa细胞增殖和迁移能力明显增强.
关键词：宫颈癌微小核糖核酸31慢病毒包装细胞增殖细胞迁移
分类号：R737.33(泌尿生殖器肿瘤)
资助基金：国家自然科学基金(81060219)国家自然科学基金(81660434)广西自然科学基金(2014GXNSFAA118266)
论文发表日期：2017-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 1-4 )
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