lncRNA-uc.412重组质粒构建及在大鼠肾小球系膜细胞中的转染
陈俊宇1
顾欣雨1
顾靖钏1
鱼敏逸2
甘卫华2
张爱青2
1.南京医科大学第二临床医学院,南京,2100112.南京医科大学第二附属医院
摘要：目的 构建长链非编码RNA-uc.412(lncRNA-uc.412)的重组质粒,并观察其转染后在大鼠肾小球系膜细胞中的表达情况.方法 自大鼠系膜细胞中提取总RNA,根据lncRNA-uc.412的基因信息设计上下游引物,应用PCR技术与琼脂糖凝胶电泳获得扩增后分离纯化的lncRNA-uc.412基因片段.将lncRNA-uc.412基因片段质粒与pRP[Exp]经双酶切处理后,通过凝胶电泳分离纯化,加入T4-DNA连接酶,即获得lncRNA-uc.412重组质粒.将lncRNA-uc.412重组质粒进行双酶切鉴定,检测目的基因片段大小;选取经双酶切鉴定连接成功的lncRNA-uc.412重组质粒,PCR扩增后进行双向测序.采用脂质体转染法转染lncRNA-uc.412重组质粒和空白质粒pRP[Exp]至大鼠肾小球系膜细胞,分别记为实验组和阴性对照组,采用RT-qPCR法检测lncRNA-uc.412在大鼠肾小球系膜细胞中的相对表达量.结果 lncRNA-uc.412重组质粒的双酶切鉴定结果显示,得到大小在200 ～300 bp的特异性条带,与lncRNA-uc.412的长度相符.测序结果显示,lncRNA-uc.412重组质粒的碱基序列与理论预期序列一致.阴性对照组大鼠肾小球系膜细胞中lncRNA-uc.412的相对表达量记为1.00±0.00,实验组大鼠肾小球系膜细胞中lncRNA-uc.412的相对表达量为8.01±0.97,两组相比,P＜0.05.结论 成功构建了lncRNA-uc.412重组质粒,并成功转染至大鼠肾小球系膜细胞.
关键词：长链非编码RNA-uc.412重组质粒肾小球系膜细胞细胞增殖肾病
分类号：R692.6(泌尿科学（泌尿生殖系疾病）)
资助基金：国家自然科学基金(81670650)江苏省自然科学基金青年项目(BK20161071)江苏省高等学校大学生创新创业训练计划(201710312039Y)江苏省高等学校大学生创新创业训练计划(201710312010Z)
论文发表日期：2019-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 9-12 )
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