Bax、Bad基因真核表达质粒构建及转染人胚肾细胞后的翻译水平观察
王孜恒
周敬伟
侯筱宇
1.徐州医科大学,江苏徐州221000;江苏省脑病生物信息重点实验室2.徐州医科大学,江苏徐州221000;江苏省脑病生物信息重点实验室3.徐州医科大学,江苏徐州221000;江苏省脑病生物信息重点实验室
摘要：目的 构建Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Bcl-2相关细胞死亡因子(Bad)基因真核表达质粒pcDNA3.1-Bax、pcDNA3.1-Bad,并观察两质粒转染至人胚肾293(HEK293)细胞后Bax、Bad的表达.方法 采用TRIzol试剂提取大鼠脑组织总RNA,利用反转录—聚合酶链反应(RT-PCR)扩增Bax和Bad的互补DNA(cDNA)序列,将cDNA分别克隆至pcDNA3.1载体上.采用脂质体转染法将序列正确的pcDNA3.1-Bax和pcDNA3.1-Bad真核表达质粒分别转染至HEK293细胞,免疫印迹法鉴定Bax、Bad在细胞中的表达.结果 双酶切和DNA测序分析显示Bax和Bad基因片段成功插入pcDNA3.1载体中,并且与其cDNA(Genbank:NM 017059.2和AF031227.1)序列完全一致.免疫印迹显示pcDNA3.1-Bax、pcDNA3.1-Bad真核表达质粒能够在HEK293细胞中高效表达.结论 pcD-NA3.1-Bax、pcDNA3.1-Bad真核表达质粒构建成功,Bax、Bad在HEK293细胞中成功过表达.
关键词：Bcl-2相关X蛋白Bcl-2相关细胞死亡因子真核表达质粒人胚肾细胞
分类号：R743.31(神经病学与精神病学)
资助基金：国家自然科学基金(81673418)江苏省高等学校自然科学研究重大项目(18KJA310007)
论文发表日期：2019-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 21-24 )
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