脐带间充质干细胞来源的外泌体-温敏水凝胶的构建及侵入性观察
陈智毅
潘道延
杨嘉旖
林凯桑
胡世弟
张彤
周凌燕
沈洁
1.南方医科大学第三附属医院,广州5100002.南方医科大学第三附属医院,广州5100003.南方医科大学第三附属医院,广州5100004.南方医科大学第三附属医院,广州5100005.南方医科大学第三附属医院,广州5100006.南方医科大学第三附属医院,广州5100007.南方医科大学第三附属医院,广州5100008.南方医科大学第三附属医院,广州510000
摘要：目的 构建脐带间充质干细胞来源的外泌体-温敏水凝胶,观察其温敏性和侵入性.方法 取脐带间充质干细胞株Saliai-HMSC(UC)-N,采用沉淀法提取外泌体,PBS重悬后获得脐带间充质干细胞来源的外泌体重悬液.取Pluronic F-127粉末,避光条件下按20％、22％、24％、26％、28％的浓度梯度分别加入脐带间充质干细胞来源的外泌体重悬液,吹打、静置后,即得到20％、22％、24％、26％、28％浓度的外泌体-温敏水凝胶溶液.将不同浓度的外泌体-温敏水凝胶溶液加入恒温水浴锅,测定初始凝胶化温度、37℃初始凝胶时间.使用PKH67对外泌体进行标记,配置PKH67标记的脐带间充质干细胞来源的外泌体重悬液和PKH67标记的24％浓度的外泌体-温敏水凝胶溶液.取脐静脉内皮细胞分成外泌体组、外泌体-温敏水凝胶组.外泌体组加入PKH67标记的脐带间充质干细胞来源的外泌体重悬液,外泌体-温敏水凝胶组加入PKH67标记的24％浓度的外泌体-温敏水凝胶溶液.两组细胞避光孵育12 h后,滴加稀释的DAPI细胞核染色液,避光孵育30 min,置于荧光倒置显微镜下观察细胞内绿色荧光(绿色荧光为PKH67标记的外泌体)分布情况,并使用Image J软件计算绿色荧光光密度百分比、绿色荧光面积百分比.结果 20％、22％、24％、26％、28％ 浓度的外泌体-温敏水凝胶溶液的初始凝胶化温度分别为(17.8±0.7)、(16.6±0.3)、(14.6±0.5)、(13.4±0.3)、(12.4±0.1)℃,37℃初始凝胶时间分别为(92±6)、(79±5)、(68±3)、(51±3)、(46±2)s,各浓度外泌体-温敏水凝胶溶液的初始凝胶化温度、37℃初始凝胶时间相比,P均<0.05,表明随着温度的变化,外泌体-温敏水凝胶的温敏特性随之变化,而24％浓度的外泌体-温敏水凝胶溶液应用更为简便.外泌体组、外泌体-温敏水凝胶组绿色荧光点分布在细胞质内,并于细胞核周围富集.外泌体组绿色荧光光密度百分比、绿色荧光面积百分比分别为0.02％ ±0.01％、0.11％ ±0.01％,外泌体-温敏水凝胶组绿色荧光光密度百分比、绿色荧光面积百分比分别为0.21％ ±0.05％、1.30％ ±0.12％,两组相比,P均<0.05.结论 成功构建了脐带间充质干细胞来源的外泌体-温敏水凝胶,具有良好的温敏性和侵入性.
关键词：外泌体脐带间充质干细胞水凝胶温敏水凝胶糖尿病慢性难愈性溃疡脐静脉内皮细胞细胞实验
分类号：R587.2(内分泌腺疾病及代谢病)
资助基金：广州市健康医疗协同创新重大专项(201604020007)
论文发表日期：2020-03-25
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 53-56 )
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