非小细胞肺癌细胞株HCC827克隆异质性及其与吉非替尼敏感性的关系
罗凯
黎谢梦丹
董静
王倩
1.广州医科大学附属肿瘤医院/广州医科大学肿瘤研究所,广东广州5100952.广州医科大学附属肿瘤医院/广州医科大学肿瘤研究所,广东广州5100953.广州医科大学附属肿瘤医院/广州医科大学肿瘤研究所,广东广州5100954.广州医科大学附属肿瘤医院/广州医科大学肿瘤研究所,广东广州510095
摘要：目的 观察非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株HCC827的克隆异质性,分析其与吉非替尼敏感性的关系.方法 取对数生长期HCC827细胞,利用极限稀释法获得单克隆化HCC827子代细胞株,分为A、B、C、D、E、F组;另取对数生长期HCC827细胞,记为亲代细胞组.采用平板克隆形成实验观察各组细胞平板克隆形成数,采用细胞生长曲线实验观察各组细胞增殖倍数,观察细胞增殖能力异质性;采用细胞药敏实验观察各组细胞对吉非替尼敏感异质性;采用Sanger直接测序法检测各组细胞EGFR基因,采用荧光原位杂交实验检测各组细胞MET、HER2基因,观察各组细胞遗传异质性;采用细胞克隆混合实验观察吉非替尼对细胞异质性的动态影响.结果 B组克隆形成数高于亲代细胞组(P<0.01),A、D、E组克隆形成数低于亲代细胞组(P均<0.05).B、F组细胞培养48、72、96、120 h时的增殖倍数与亲代细胞组相比,P均<0.05;C、D组细胞培养72、96、120 h时的增殖倍数与亲代细胞组相比,P均<0.05;其中B组细胞增殖倍数最高,D组细胞增殖倍数最低.B组细胞为对吉非替尼最敏感的细胞组,其余各组细胞对吉非替尼的IC50值与亲代细胞组相比,P均<0.05,其中D组细胞为对吉非替尼IC50值最高的细胞组.亲代细胞组与A～F组细胞均为EGFR基因19 Del突变.D组细胞HER2基因扩增为阳性、MET基因扩增为阴性,而亲代细胞组和A、B、C、E、F组细胞HER2基因和MET基因扩增均为阴性.在吉非替尼压力下,吉非替尼敏感B克隆细胞和耐药D克隆细胞等比例混合培养2周后耐药细胞获得绝对生长优势,B克隆细胞与亲代细胞等比例混合培养2周后少量残留细胞中亲代细胞存在相对优势,D克隆细胞与亲代细胞等比例混合培养2周后两细胞均势生长.结论 HCC827细胞在增殖能力、药物敏感性等表型层面和驱动基因等遗传背景层面均存在克隆异质性,并且其克隆异质性与吉非替尼敏感性有关.
关键词：非小细胞肺癌克隆异质性遗传异质性吉非替尼药物耐受细胞实验
分类号：R73-3(肿瘤学实验研究)
资助基金：广东省医学科学技术研究基金项目(B2019063)广州市卫生和计划生育科技项目(20191A011099)
论文发表日期：2020-11-25
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 1-5 )
英文信息