GATA4基因慢病毒载体构建与鉴定
张帆1
厍广岩2
钟浩2
马伟2
宗渊3
武建英2
1.青海大学,西宁810016;青海大学附属医院2.青海大学附属医院3.青海大学,西宁810016
摘要：目的 构建锌指转录因子4(GATA4)基因慢病毒载体并鉴定.方法 设计2条GATA4基因siRNA干扰序列,与双酶切后的pMGic7.1载体连接.将构建的GATA4基因慢病毒载体转染293T细胞,随机分为实验组、阴性对照组、空白对照组,采用Western bloting法检测GATA4蛋白表达,采用RT-qPCR法检测GATA4 mRNA表达.结果 pMGic7.1载体可与其中1条siRNA干扰序列正确连接,其基因序列如下:CGAAACACCGGGGACATAAT-CACTGCGTAATCCTCGAGGATTACGCAGTGATTATGTCCTTTTTTGAATTCGGA(黑体部分为siRNA干扰序列),符合实验要求.空白对照组未添加目的基因,在45 kDa处无蛋白条带;实验组GATA4蛋白相对表达量为0.739±0.056,阴性对照组为0.997±0.001,两组比较P<0.05.实验组GATA4 mRNA相对表达量为0.362±0.024,阴性对照组为0.998±0.001,空白对照组为0.812±0.001,实验组GATA4 mRNA相对表达量明显低于阴性对照组和空白对照组(P均<0.05).结论 成功构建了GATA4基因的慢病毒载体,GATA4基因在体外可被有效抑制.
关键词：先天性心脏病锌指转录因子4RNA干扰基因沉默
分类号：R541.1(心脏、血管（循环系）疾病)
资助基金：国家自然科学基金(31571231)青海省临床医学研究中心项目(2019-SF-L2)
论文发表日期：2020-12-05
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 44-47,56 )
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