肠上皮细胞紧密连接模型的建立与验证
陈婷1
张娇2
王晓鸽3
康楠4
王凤云1
唐旭东1
1.中国中医科学院西苑医院脾胃病研究所,北京1000912.北京市昌平区中医医院脾胃病科3.河南中医药大学附属第一医院脾胃肝胆科4.济宁医学院附属医院中医科
摘要：目的 体外分化Caco-2细胞建立肠上皮细胞紧密连接模型,并对其进行综合评价.方法 将融合至90％的Caco-2细胞以8×104/孔接种于Transwell 24孔培养板上,每孔基底侧加入MEM培养基600μL,顶侧加入细胞悬液100μL;接种后第1周隔日更换培养液,第2周起每日更换培养液,直至培养第21天.细胞培养第3、5、7、15、19、21天,使用细胞电阻仪测定跨膜电阻(TER);细胞培养第5、15、21天,取细胞单层顶侧与基底侧培养基并检测其碱性磷酸酶(ALP)活力,计算顶侧与基底侧ALP活力比;取体外分化培养21天的Caco-2细胞,使用多功能酶标仪检测大分子物质荧光黄(FD-4)通过单层细胞的百分率(即FD-4通透率)及跨膜转运表观渗透系数(Papp),透射电镜下观察细胞形态.结果 Caco-2细胞体外分化培养第3、5、7、15天的TER均明显低于第19、21天(P均<0.05),Caco-2细胞体外分化培养第19和21天TER比较无统计学差异(P>0.05).Caco-2细胞体外分化培养第5、15、21天顶侧与基底侧ALP活力比分别为1.43±0.16、2.43±0.28、4.85±0.25,Caco-2细胞体外分化培养第5、15天顶侧与基底侧ALP活力比均明显低于第21天(P均<0.05).体外分化培养第21天的Caco-2细胞FD-4通透率为2.31％±1.12％,Papp为(1.95±0.90)×10-7 cm/s.透射电镜观察结果显示,体外分化培养第21天的Caco-2细胞由微绒毛形成的刷状缘排列整齐致密;细胞顶侧面分化出完整的紧密连接结构,表现为连续的融合点,呈"焊接线"样围绕在细胞膜的顶部,相邻细胞膜被"焊接"在一起,形成绳索样结构.结论 Caco-2细胞在Transwell板体外分化21天后可形成肠上皮细胞紧密连接结构,证实成功构建肠上皮细胞紧密连接模型.
关键词：细胞紧密连接肠上皮细胞跨膜电阻碱性磷酸酶荧光黄通透率
分类号：R574(消化系及腹部疾病)
资助基金：国家自然科学基金(82074420)中国科协青年人才托举工程专项(CACM-2019-QNRC1-02)中国中医科学院优秀青年科技人才培养专项(ZZ13-YQ-009)中国中医科学院优秀青年科技人才培养专项(ZZ13-YQ-009-C1)
论文发表日期：2022-12-15
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 1-4 )
英文信息