miR-199b-5p对阿霉素诱导足细胞凋亡的影响及机制
吴静漪
江苏盛泽医院儿科,江苏苏州215228
摘要：目的 探讨miR-199b-5p对阿霉素诱导足细胞凋亡的影响及机制.方法 体外培养小鼠足细胞,用阿霉素构建足细胞凋亡模型.将足细胞随机分成对照组、阿霉素组、阿霉素+miR-199b-5p mimic组、阿霉素+NC mimic组、阿霉素+miR-199b-5p inhibitor组、阿霉素+NC inhibitor组、阿霉素+miR-199b-5p mimic+Ad-脂肪细胞质膜相关蛋白(APMAP)组、阿霉素+miR-199b-5p mimic+Ad-NC组、阿霉素+miR-199b-5p inhibitor+Ad-APMAP RNAi组和阿霉素+miR-199b-5p inhibitor+Ad-NC RNAi组,分别给予miR-199b-5p mimic/inhibitor、过表达/敲低APMAP腺病毒转染,使miR-199b-5p过表达/沉默表达以及APMAP过表达/沉默表达.用实时荧光定量PCR检测细胞内miR-199b-5p及足细胞标志蛋白(Podocin)、凋亡相关基因(Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-3)、APMAP mRNA表达,用Western blotting法检测细胞内Podocin、Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-3、APMAP及NF-κB信号通路相关蛋白(NIK、TRAF3)表达.用生物信息学分析miR-199b-5p的特异性下游靶基因;将细胞随机分为NC mimic+WT-APMAP组、miR-199b-5p+WT-AP?MAP组、NC mimic+MUT-APMAP组、miR-199b-5p+MUT-APMAP组,用双荧光素酶报告基因实验验证miR-199b-5p的直接靶基因.结果 与对照组比较,阿霉素组miR-199b-5p、Bax、Cleaved caspase-3、NIK相对表达量高(P均<0.05),Podocin、Bcl-2、APMAP、TRAF3相对表达量低(P均<0.05).与阿霉素+NC mimic组比较,阿霉素+miR-199b-5p mimic组Podocin、Bcl-2、APMAP、TRAF3相对表达量低,Bax、Cleaved caspase-3、NIK相对表达量高(P均<0.05).与阿霉素+NC inhibitor组比较,阿霉素+miR-199b-5p inhibitor组Podocin、Bcl-2、APMAP、TRAF3相对表达量高,Bax、Cleaved cas?pase-3、NIK相对表达量低(P均<0.05).双荧光素酶报告基因实验证实,与NC mimic+MUT-APMAP组比较,miR-199b-5p+WT-APMAP组APMAP荧光素酶活性低(P<0.05).与阿霉素+miR-199b-5p mimic+Ad-NC组比较,阿霉素+miR-199b-5p mimic+Ad-APMAP组TRAF3相对表达量高,NIK相对表达量低(P均<0.05).与阿霉素+miR-199b-5p inhibitor+Ad-NC RNAi组比较,阿霉素+miR-199b-5p inhibitor+Ad-APMAP RNAi组TRAF3相对表达量低,NIK相对表达量高(P均<0.05).结论 miR-199b-5p通过靶向APMAP激活NF-κB信号通路促进阿霉素诱导足细胞凋亡.
关键词：慢性肾脏病足细胞凋亡微小RNA-199b-5p阿霉素脂肪细胞质膜相关蛋白
分类号：R692(泌尿科学（泌尿生殖系疾病）)
资助基金：苏州市科技局民生科技项目(SYSD2018043)
论文发表日期：2023-03-05
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 25-29 )
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