口腔肿瘤干细胞样细胞中锌指蛋白750的潜在靶蛋白筛选
姜博1
于水2
杨一昆1
徐聪1
杨红莉1
陈海英1
1.聊城市人民医院中心实验室,山东聊城 2520002.聊城市人民医院样本库
摘要：目的 筛选锌指蛋白750(ZNF750)在口腔肿瘤干细胞样细胞(CSC-like cell)中的潜在靶蛋白.方法 ①CSC-like cell的富集:采用肿瘤球形成实验富集口腔鳞癌(OSCC)细胞系TCA-83及CAL-27细胞中CSC-like cell细胞.② CSC-like cell细胞中ZNF750潜在靶蛋白筛选:将CSC-like cell分为oe-Con组(转导空载体慢病毒)及oe-ZNF750组(转导过表达ZNF750慢病毒),采用TMT标记定量蛋白质组学技术筛选两组差异表达蛋白,对差异表达蛋白进行生物信息学分析[GO、KEGG及IPR(结构域)分析],从差异表达蛋白中选择与ZNF750关系密切的候选蛋白[角鲨烯合酶(FDFT1)、与糖代谢相关的糖原合成酶(GYS1)、与核糖体相关的核糖体蛋白RPL15及40S核糖体蛋白RPS7以及具有结构分子活性的角蛋白6A、17(KRT6A、KRT17)]进行实时荧光定量PCR(qPCR)验证.从与ZNF750关系密切的候选蛋白中选择FDFT1(与类固醇生物合成有关兼具酶转运活性)作为兴趣蛋白,采用qPCR检测CSC-like cell、口腔鳞癌(OSCC)细胞、正常口腔上皮细胞中FDFT1 mRNA的相对表达量,蛋白质印迹法检测过表达或敲减ZNF750基因的CSC-like cell中FDFT1蛋白相对表达量.结果 ①转导过表达ZNF750基因的 CSC-like cell细胞中差异表达蛋白的筛选结果:与oe-Con组相比,oe-ZNF750组中差异表达蛋白共26个,其中上调9个,下调17个.②差异表达蛋白生信分析结果及其中与ZNF750关系密切的差异表达蛋白验证结果:GO分析结果显示,差异表达蛋白主要位于细胞内和细胞内非膜结合细胞器,参与生物合成及生物大分子的合成过程;涉及的生物功能包含结构分子活性、糖原合成酶活性、糖脂转运及糖脂结合功能;KEGG 信号通路分析结果显示,差异表达蛋白显著富集在类固醇生物合成及糖代谢过程中;IPR分析证明富集的结构域包含糖脂转移蛋白结构域.qPCR结果显示,ZNF750可降低FDFT1、GYS1、RPL15、RPS7、KRT6A、KRT17基因的表达(P均＜0.05).③ CSC-like cell及过表达或敲减ZNF750基因的CSC-like cell中 FDFT1蛋白表达变化:与正常口腔上皮细胞比较,OSCC及CSC-like cell中FDFT1的表达上调,以CSC-like cell为著(P均＜0.05).分别与各自匹配的阴性对照组比较,过表达ZNF750的CSC-like cell中FDFT1蛋白表达下调,敲减ZNF750的CSC-like cell中FDFT1蛋白表达上调(P均＜0.05).结论 过表达ZNF750的CSC-like cell中差异表达蛋白共26个,其中上调9个、下调17个;差异表达蛋白主要与生物大分子合成及类固醇生物合成有关;FDFT1可能是ZNF750的潜在靶蛋白.
关键词：锌指蛋白750角鲨烯合酶胆固醇代谢肿瘤干细胞蛋白组学测序技术同位素标记定量技术口腔鳞癌
分类号：R739.8(口腔、颌面部肿瘤)
资助基金：国家自然科学基金(81773759)
论文发表日期：2023-05-25
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 38-42 )
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