柚皮苷联合Ad-SDF-1α对极度低氧环境下MSC成骨分化及迁移的影响
宁宇1
汪伟2
何继文1
吴群海1
刘想忠3
许海甲3
1.湖北中医药大学附属襄阳市中医医院 襄阳市中医药研究所骨伤科,湖北襄阳4410002.湖北省中医院骨伤科3.武汉大学附属同仁医院 武汉市第三医院骨科
摘要：目的 观察柚皮苷联合基质细胞衍生因子1腺病毒(Ad-SDF-1α)对极度低氧环境下间充质干细胞(MSC)成骨分化及迁移的影响.方法 用Percoll密度梯度离心法分离提取兔MSC,常规培养并传代.将不同浓度柚皮苷培养基加入MSC,常氧条件培养3 d,筛选柚皮苷最佳实验浓度.取传三代的MSC,随机分为5组,阴性对照Ad-GFP组转染阴性对照腺病毒Ad-GFP,Ad-SDF-1α组、柚皮苷+Ad-SDF-1α组转染Ad-SDF-1α,空白组、柚皮苷组加入空白MSCM培养基,在常氧环境下培养6 h.取各组细胞,柚皮苷组、柚皮苷+Ad-SDF-1α组均加入1×10-4 mol/L柚皮苷培养基,空白组、阴性对照Ad-GFP组、Ad-SDF-1α组加入空白MSCM培养基,在极度低氧环境下继续培养3 d.用qPCR法检测成骨基因(BMP-2、Smad1、Smad5、Smad8、Runx2、Osterix)、迁移基因(CXCR4)表达,用Western bloting法检测BMP-2、Smads、Runx2、Osterix、CXCR4蛋白表达,ELISA法检测细胞上清液中SDF-1α,用茜素红S染色法检测细胞成骨能力,用Transwell实验检测细胞迁移能力.结果 不同浓度柚皮苷干预后MSC中BMP-2 mRNA表达较0 mol/L高(P均＜0.05);柚皮苷浓度越高,BMP-2 mRNA表达越高.柚皮苷浓度高于1×10-4 mol/L时,SDF-1α、CXCR4 mRNA表达降低(P均＜0.05);柚皮苷浓度低于1×10-4 mol/L时,SDF-1α、CXCR4 mRNA表达与0 mol/L比较差异无统计学意义(P均＞0.05).因此,选取1×10-4 mol/L为柚皮苷最佳实验浓度.与空白组、阴性对照Ad-GFP组、柚皮苷组比较,柚皮苷+Ad-SDF-1α组成骨基因(BMP-2、Smad1、Smad5、Smad8、Runx2、Osterix)、迁移基因(CXCR4)表达均高(P均＜0.05).与空白组、阴性对照Ad-GFP组比较,柚皮苷组BMP-2、Smads、Runx2、Osterix蛋白表达高(P均＜0.05);与柚皮苷组比较,柚皮苷+Ad-SDF-1α组BMP-2、Smads、Runx2、Osterix、CXCR4蛋白表达及SDF-1α水平高(P均＜0.05).与空白组、阴性对照Ad-GFP组、Ad-SDF-1α组比较,柚皮苷组、柚皮苷+Ad-SDF-1α组矿化结节钙盐沉积吸光度值高(P均＜0.05).与空白组、阴性对照Ad-GFP组、柚皮苷组比较,Ad-SDF-1α组、柚皮苷+Ad-SDF-1α组迁移细胞吸光度值高(P均＜0.05).结论 极度低氧环境下,柚皮苷与Ad-SDF-1α可协同促进MSC的成骨分化,同时不影响Ad-SDF-1α促MSC迁移的作用.
关键词：柚皮苷基质细胞衍生因子1腺病毒低氧间充质干细胞细胞成骨分化细胞迁移
分类号：R329.2(人体形态学)
资助基金：湖北省自然科学基金(2020CFB369)湖北省自然科学基金(2021CFB217)湖北省中医药管理局中医药科研项目(ZY2023Q021)武汉市医学科研项目(WX20D91)襄阳市科技研究与开发项目(2020YL25)
论文发表日期：2023-06-05
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 36-41 )
英文信息