TFAP2A对肾小球硬化相关基因NPHS2的转录调控作用观察
张小田1
周国平2
1.南京医科大学附属逸夫医院儿科,南京 2111122.南京医科大学第一附属医院儿科
摘要：目的 观察转录因子AP-2α(TFAP2A)对肾小球硬化相关基因NPHS2的转录调控作用.方法 基于GEO数据库及GEO Profiles数据集,比较肾透明细胞癌组织与正常肾组织中NPHS2、TFAP2A的表达差异.构建含NPHS2基因5′侧翼区域重组报告质粒,预测NPHS2基因的-519 bp～+20 bp启动子区包含转录因子TFAP2A的结合位点.培养HEK-293T细胞,对照siRNA组转染control siRNA,实验组分别转染TFAP2A siRNA(浓度分别为5、10、15 pmol/μL)和TFAP2A过表达质粒(质量浓度分别为50、100、300 ng/mL),通过双萤光素酶报告基因实验验证TFAP2A对NPHS2基因启动子水平的调控作用.将HEK-293T细胞分为对照组、干扰组及过表达组,分别转染con-trol siRNA、TFAP2A siRNA及TFAP2A过表达质粒;采用荧光定量PCR检测TFAP2A、NPHS2 mRNA,采用Western blotting法检测NPHS2蛋白.结果 肾透明细胞癌组织中TFAP2A、NPHS2表达低于正常肾组织.成功构建含NPHS2基因5′侧翼区域重组报告质粒,NPHS2基因转录起始位点上游-519 bp～+20 bp区域包含两个TFAP2A转录因子结合位点.双萤光素酶报告基因实验结果显示,与对照siRNA组相比,转染5、10、15 pmol/μL TFAP2A siRNA的实验组细胞NPHS2启动子荧光素酶活性均增强,转染300 ng/mL TFAP2A过表达质粒的实验组细胞NPHS2启动子荧光素酶活性降低(P均<0.05).干扰组NPHS2 mRNA及蛋白表达高于对照组,过表达组NPHS2 mRNA及蛋白表达低于对照组(P均<0.05).结论 NPHS2启动子-519 bp～+20 bp区域存在潜在的TFAP2A转录因子结合位点;TFAP2A可下调NPHS2的启动子活性、mRNA及蛋白表达.
关键词：转录因子AP-2αNPHS2基因肾小球硬化转录调控
分类号：R692.6(泌尿科学（泌尿生殖系疾病）)
资助基金：国家自然科学基金(8197031875)南京医科大学校科技发展基金项目(NMUB20220051)
论文发表日期：2023-11-15
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 20-24 )
英文信息