基于IL-6/STAT3信号通路探讨miR-34a-5p过表达对溃疡性结肠炎的影响及小檗碱的干预作用
陈琴1
张志云1
石西南2
万春平3
朱云婴1
娄龙1
徐瑞1
1.昆明市中医医院肛肠科,昆明 6500112.云南中医药大学基础医学院3.云南中医药大学第一附属医院中心实验室
摘要：目的 基于白细胞介素6(IL-6)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路探讨微小RNA-34a-5p(miR-34a-5p)过表达对溃疡性结肠炎(UC)的影响及小檗碱(BBR)的干预作用.方法 体外传代培养人结肠癌HT-29细胞.取传3代、对数生长期、生长状态良好的HT-29细胞,随机分为空白对照组、NC mimics组、miR-34a-5p mimics组,NC mimics组和miR-34a-5p mimics组分别转染NC mimics、miR-34a-5p mimics,空白对照组不予转染.转染6 h更换新鲜培养基继续培养48 h,收集细胞,采用RT-qPCR法验证转染效率.收集三组转染后细胞,采用CCK-8法检测细胞活力;分离三组培养上清液,采用ELISA法检测IL-6、IL-1β、TNF-α含量;收集三组转染后细胞,分别采用RT-qPCR法、Western blotting法检测IL-6、STAT3 mRNA和蛋白表达.取HT-29细胞,加入LPS 刺激48 h,建立UC细胞模型.取UC细胞,分别加入0、2.5、5、10、20、40、80、160、320 μg/mL BBR干预24 h,采用CCK-8法检测细胞活力.随机将UC细胞分为模型组和BBR组,BBR组予BBR干预24 h,模型组不予BBR干预.分离两组培养上清液,采用ELISA法检测IL-6、IL-1β、TNF-α含量;取两组干预24 h细胞,采用RT-qPCR法检测miR-34a-5p以及IL-6、STAT3 mRNA表达.结果 miR-34a-5p mimics组miR-34a-5p相对表达量高于NC mimics组和空白对照组(P均<0.05),NC mimics组与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).miR-34a-5p mimics组细胞活力低于NC mimics组和空白对照组(P均<0.05),NC mimics组与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).miR-34a-5p mimics组培养上清液IL-6、IL-1β、TNF-α含量均低于NC mimics组和空白对照组(P均<0.05),NC mimics组与空白对照组比较差异均无统计学意义(P均>0.05).miR-34a-5p mimics组IL-6、STAT3 mRNA以及IL-6蛋白相对表达量均低于NC mimics组和空白对照组(P均<0.05),NC mimics组与空白对照组比较差异均无统计学意义(P均>0.05).40、80、160、320 μg/mL BBR干预24 h UC细胞活力均高于0、2.5、5、10、20 μg/mL BBR干预24 h UC细胞(P均<0.05),故选择20 μg/mL BBR进行后续实验.BBR组培养上清液IL-6、IL-1β、TNF-α含量均低于模型组(P均<0.05);BBR组miR-34a-5p相对表达量高于模型组,IL-6、STAT3 mRNA相对表达量均低于模型组(P均<0.05).结论 miR-34a-5p过表达能够通过抑制IL-6/STAT3信号通路减轻UC炎症反应;BBR则能通过上调miR-34a-5p表达和抑制IL-6/STAT3信号通路,减轻UC炎症反应,阻延UC癌变.
关键词：溃疡性结肠炎小檗碱微小RNA-34a-5p白细胞介素6/信号转导和转录激活因子3信号通路
分类号：R574.6(消化系及腹部疾病)
资助基金：云南省中医药应用基础研究联合专项-面上项目(202101AZ070001-268)昆明市卫生健康委员会卫生科研课题(2022-04-01-009)昆明市卫生科技人才培养项目(2022-SW;60)
论文发表日期：2024-01-05
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 1-5 )
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