敲低lncRNA MIR31HG对肝细胞癌细胞黏附、侵袭、迁移和上皮间质转化的影响及其机制
耿蕴峰
张景承
薛菲
王冬冬
石家庄市人民医院普外二科,石家庄 050030
摘要：目的 探讨敲低长链非编码RNA(lncRNA)MIR31HG对肝细胞癌(HCC)细胞黏附、侵袭、迁移和上皮间质转化(EMT)的影响及其机制.方法 体外传代培养高侵袭性HCC细胞系MHCC97H、低侵袭性HCC细胞系MHCC97L以及人正常肝细胞系LO2,采用RT-qPCR法检测各细胞系lncRNA MIR31HG、miR-361相对表达量,选择lncRNA MIR31HG相对表达量较高的HCC细胞进行后续实验.取HCC细胞,随机分为对照组和敲低组,对照组转染NC siRNA,敲低组转染MIR31HG siRNA,转染6 h更换新鲜培养基,继续培养48 h,采用RT-qPCR法验证转染效率.收集两组转染后细胞,采用细胞-基质黏附实验、Transwell小室实验分别检测细胞黏附、侵袭和迁移能力,采用Western blotting法检测E-cadherin、N-cadherin、Fibronectin等EMT相关蛋白表达.通过LncBase V.2在线软件预测lncRNA MIR31HG与miR-361的结合位点,并采用双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA MIR31HG与miR-361的靶向调控关系.结果 MHCC97H、MHCC97L细胞lncRNA MIR31HG相对表达量均高于LO2细胞,miR-361相对表达量均低于LO2细胞(P均<0.05);MHCC97H细胞lncRNA MIR31HG相对表达量高于MHCC97L细胞,miR-361相对表达量低于MHCC97L细胞(P均<0.05).因此,选择MHCC97H细胞进行后续实验.敲低组lncRNA MIR31HG相对表达量低于对照组(P<0.05).敲低组细胞黏附、侵袭和迁移能力均低于对照组(P均<0.05).敲低组E-cadherin蛋白表达高于对照组,N-cadherin、Fibronectin蛋白表达均低于对照组(P均<0.05).经LncBase V.2在线软件预测,lncRNA MIR31HG存在与miR-361的结合位点;双荧光素酶报告基因实验证实,转染MIR31HG WT + miR-361 mimics的HCC细胞荧光素酶活性低于转染MIR31HG WT + NC mimics的HCC细胞(P<0.05),而转染MIR31HG MUT + miR-361 mimics与MIR31HG MUT + NC mimics的HCC细胞荧光素酶活性比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 HCC细胞lncRNA MIR31HG高表达;敲低lncRNA MIR31HG则能抑制HCC细胞的黏附、侵袭和迁移以及EMT,其机制可能与lncRNA MIR31HG能够靶向调控miR-361有关.
关键词：肝细胞癌长链非编码RNA MIR31HG微小RNA-361细胞黏附细胞侵袭细胞迁移上皮间质转化
分类号：R735.7(消化系肿瘤)
资助基金：河北省医学科学研究课题(20231595)
论文发表日期：2024-01-05
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 20-24 )
英文信息