miR-660-3p靶向NFAM1对RSV诱导支气管上皮细胞凋亡及炎症因子分泌的影响
童珍珍1
高雅丽1
许娟娟2
黄方3
许诣3
陈霞3
1.上海市嘉定区安亭医院呼吸内科,上海 2018052.华中科技大学同济医学院附属协和医院呼吸内科3.湖北文理学院附属医院 襄阳市中心医院儿科
摘要：目的 探讨微小RNA-660-3p(miR-660-3p)靶向具有ITAM基序1的NFAT活化蛋白(NFAM1)对呼吸道合胞病毒(RSV)诱导支气管上皮细胞凋亡和炎症因子分泌的影响.方法 体外传代培养人支气管上皮细胞16HBE.取对数生长期16HBE细胞,随机分为对照组、RSV组、miR-660-3p + RSV组、miR-NC + RSV组、pcDNA-NC + RSV组、pcDNA-NFAM1 + RSV组、miR-660-3p + pcDNA-NC + RSV组、miR-660-3p + pcDNA-NFAM1 + RSV组,miR-NC + RSV组转染NC mimics,miR-660-3p + RSV组转染miR-660-3p mimics,pcDNA-NFAM1 + RSV组转染pcDNA-NFAM1,pcDNA-NC + RSV组转染pcDNA-NC,miR-660-3p + pcDNA-NC + RSV组共转染pcDNA-NC和miR-660-3p mimics,miR-660-3p + pcDNA-NFAM1 + RSV组共转染pcDNA-NFAM1和miR-660-3p mimics,对照组和RSV组不予转染;除对照组外,其余各组均予RSV感染,MOI设定为0.000 1.收集各组细胞,采用RT-qPCR法检测miR-660-3p、NFAM1 mRNA表达,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用Western blotting法检测Cleaved-Caspase-3、NFAM1蛋白表达;收集各组培养上清液,采用ELISA法检测TNF-α、IL-6、IL-1β.通过starBase数据库预测NFAM1与miR-660-3p的靶向结合位点,并采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-660-3p与NFAM1的靶向调控关系.结果 与对照组比较,RSV组miR-660-3p表达降低,NFAM1 mRNA与蛋白及Cleaved-Caspase-3蛋白表达升高,细胞凋亡率及培养上清液TNF-α、IL-6、IL-1β水平升高(P均＜0.05).与miR-NC + RSV组比较,miR-660-3p + RSV组miR-660-3p表达升高,Cleaved-Caspase-3蛋白表达以及细胞凋亡率和培养上清液TNF-α、IL-6、IL-1β水平降低(P均＜0.05).与pcDNA-NC + RSV组比较,pcDNA-NFAM1 + RSV组NFAM1 mRNA、Cleaved-Caspase-3蛋白表达以及细胞凋亡率和培养上清液TNF-α、IL-6、IL-1β水平升高(P均＜0.05).经starBase数据库预测,NFAM1的3′非翻译区存在与miR-660-3p的结合位点.双荧光素酶报告基因实验结果显示,相较于共转染NC mimics与NFAM1-WT的16HBE细胞,共转染miR-660-3p mimics与NFAM1-WT的16HBE细胞荧光素酶活性下降(P＜0.05);相较于共转染NC mimics与NFAM1-MUT的16HBE细胞,共转染miR-660-3p mimics与NFAM1-MUT的16HBE细胞荧光素酶活性变化不明显(P＞0.05).与miR-660-3p + pcDNA-NC + RSV组比较,miR-660-3p + pcDNA-NFAM1 + RSV组Cleaved-Caspase-3蛋白表达以及细胞凋亡率和培养上清液TNF-α、IL-6、IL-1β水平升高(P均＜0.05).结论 miR-660-3p可通过靶向负调控NFAM1抑制RSV诱导支气管上皮细胞凋亡及炎症因子分泌.
关键词：支气管哮喘微小RNA-660-3p具有ITAM基序1的NFAT活化蛋白细胞凋亡炎症因子
分类号：R562(呼吸系及胸部疾病)
论文发表日期：2024-05-05
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 30-35 )
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