二甲双胍对创伤性脑损伤后神经元凋亡的影响及机制
朱磊1
李政委2
尹红3
王学成1
徐妍妍1
王楠1
1.徐州医科大学附属徐州儿童医院重症医学科,江苏 徐州 2210062.徐州医科大学附属徐州儿童医院神经外科3.徐州医科大学附属医院药学部
摘要：目的 探讨二甲双胍(MET)对创伤性脑损伤(TBI)后神经元凋亡的影响及可能机制.方法 选择小鼠海马神经元(HT22)细胞进行实验,将HT22细胞随机分为对照组、TBI组、MET1、MET2组,除对照组外,其余组通过机械划痕构建TBI体外模型.Westem blotting法测定Bcl-2腺病毒E1B-19 kD相互作用蛋白3(BNIP3)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、p62、线粒体外模转位酶20(TOMM20)、细胞色素C氧化酶4(COX Ⅳ)表达,免疫荧光双染观察线粒体和溶酶体共定位情况,TUNEL染色法检测细胞凋亡率,LDH试剂盒检测细胞上清液LDH活性.应用小干扰RNA(siRNA)抑制BNIP3表达,并随机分为对照 siRNA 组、BNIP3-siRNA 组、对照siRNA+TBI 组、BNIP3-siRNA+TBI 组,实验终点观察上述指标变化.结果 TBI组神经元凋亡率高于对照组(P<0.05).TBI组BNIP3表达及LC3-Ⅱ/Ⅰ值均高于对照组(P均<0.05),而p62、TOMM20、COX Ⅳ表达均低于对照组(P均<0.05).激光共聚焦显微镜观察发现,TBI组细胞线粒体溶酶体共定位较对照组增加.MET 1组和2组神经元凋亡率均低于TBI组(P均<0.05),且MET 2组细胞凋亡率较MET 1组进一步降低(P<0.05).MET 1组BNIP3表达及LC3-Ⅱ/Ⅰ值均较TBI组降低(P均<0.05);MET 2组BNIP3表达及LC3-Ⅱ/Ⅰ值较MET 1组进一步降低(P均<0.05).MET 1组p62、TOMM20、COX Ⅳ表达均较TBI组升高(P均<0.05);MET 2组p62、TOMM20、COX Ⅳ表达较MET 1组进一步升高(P均<0.05).激光共聚焦显微镜观察发现,MET 1组细胞线粒体溶酶体共定位较TBI组减少,MET 2组细胞线粒体溶酶体共定位较MET 1组进一步减少.对照siRNA+TBI 组及BNIP3-siRNA+TBI组细胞凋亡率分别为(32.57±2.68)%、(16.59±1.80)%,差异有统计学意义(P<0.05).对照siRNA+TBI 组BNIP3表达水平及LC3-Ⅱ/Ⅰ值分别为0.66±0.01、1.46±0.02,高于BNIP3-siRNA+TBI组(P均<0.05);而对照siRNA+TBI 组p62、TOMM20、COX Ⅳ相对表达量分别为0.06±0.01、0.14±0.01、0.09±0.01,低于BNIP3-siRNA+TBI组(P均<0.05).激光共聚焦显微镜观察发现,对照siRNA+TBI 组线粒体溶酶体共定位较BNIP3-siRNA+TBI组增加.结论 MET可抑制TBI后神经元凋亡,其机制可能与抑制BNIP3介导的线粒体自噬有关.
关键词：创伤性脑损伤二甲双胍Bcl-2腺病毒E1B-19kD相互作用蛋白3线粒体自噬
分类号：R651.1(外科学各论)
资助基金：江苏省卫生健康委科研课题(M2021083)徐州市科技计划项目(KC21152)彭城英才-医学青年后备人才项目(XWRCHT20220021)
论文发表日期：2024-12-05
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 43-48 )
英文信息