柴胡疏肝散治疗肝纤维化核心靶基因筛选及对肝星状细胞活化的影响
王帅
葛茂旭
刘安昌
山东大学齐鲁医院药剂科(临床药学部),山东 济南 250012
摘要：目的 利用网络药理学方法筛选柴胡疏肝散治疗肝纤维化的核心靶基因,分析柴胡疏肝散对肝星状细胞活化的影响及机制.方法 将柴胡疏肝散有效活性成分的作用靶基因与肝纤维化疾病相关靶基因取交集,得到柴胡疏肝散治疗肝纤维化的潜在靶基因,进行基因本体论(GO)功能及KEGG、Reactome通路富集分析;利用STRING平台构建潜在靶基因的蛋白质相互作用网络图,根据度值筛选核心靶基因.将人肝星状细胞系LX-2分为转化生长因子β1(TGF-β1)组、低剂量组、中剂量组、高剂量组(分别加入2 ng/mL TGF-β1及0、12.5、25、50 mg/mL柴胡疏肝散作用24 h)和Control组(不予处理),采用实时荧光定量PCR法及Western blotting法检测细胞纤维化标志物Ⅰ型胶原α1链(COL1A1)、波形蛋白(vimentin)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA及蛋白表达,免疫荧光法检测细胞纤连蛋白(Fibronectin)表达(以绿色荧光强度表示).将LX-2细胞随机分为pcDNA3.1组、信号传导转录激活因子3(STAT3)-Flag组(分别转染pcDNA3.1质粒、pcDNA3.1-STAT3-Flag质粒)和对照组(不予处理),pcDNA3.1组和STAT3-Flag组转染后均分为TGF-β1及TGF-β1+低、中、高剂量柴胡疏肝散四部分,分别给予2 ng/mL TGF-β1及0、12.5、25、50 mg/mL柴胡疏肝散作用24 h,采用Western blotting法检测p-STAT3及COL1A1、vimentin、α-SMA蛋白表达.结果 共得到柴胡疏肝散治疗肝纤维化潜在靶基因45个[核心靶基因12个,度值最大的是STAT3],富集于细胞迁移正调控、对缺氧的响应、转录因子结合、蛋白激酶活性等功能,以及白细胞介素信号转导、JAK-STAT信号通路等.与Control组比较,TGF-β1组细胞COL1A1、vimentin、α-SMA mRNA及蛋白相对表达量均升高(P均<0.05).与TGF-β1组比较,低、中、高剂量组COL1A1 mRNA及蛋白相对表达量均降低,且中、高剂量组COL1A1 mRNA相对表达量降低更明显(P均<0.05);与TGF-β1组比较,高剂量组vimentin、α-SMA mRNA及蛋白相对表达量均降低(P均<0.05).与对照组比较,TGF-β1组细胞内绿色荧光强度升高;与TGF-β1组比较,低、中、高剂量组细胞内绿色荧光强度依次降低.对照组、仅加入TGF-β1的pcDNA3.1组、仅加入TGF-β1的STAT3-Flag组细胞p-STAT3、COL1A1、vimentin、α-SMA蛋白相对表达量依次升高(P均<0.05).与仅加入TGF-β1的同组细胞比较,加入TGF-β1与低、中、高剂量柴胡疏肝散的pcDNA3.1组细胞p-STAT3蛋白相对表达量依次降低(P均<0.05),而加入TGF-β1与低、中、高剂量柴胡疏肝散的STAT3-Flag组细胞p-STAT3蛋白相对表达量无明显变化(P均>0.05).相同处理方式的STAT3-Flag组细胞COL1A1、vimentin、α-SMA蛋白相对表达量均高于pcDNA3.1组(P均<0.05).结论 柴胡疏肝散治疗肝纤维化的核心靶基因有STAT3,其抑制肝星状细胞活化的机制可能与调控STAT3信号通路有关.
关键词：柴胡疏肝散网络药理学肝纤维化肝星状细胞信号传导转录激活因子3信号通路
分类号：R575.2(消化系及腹部疾病)
资助基金：山东省自然科学基金青年基金资助项目(ZR2021QH204)
论文发表日期：2025-03-25
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 1-6 )
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