同时靶向人CD3、CD19、PD-L1的三特异性T淋巴细胞衔接器TriTE-3-19-1的构建与杀伤作用观察
段惠1
韩建庚1
卢杨2
张洁1
张晓龙1
1.天津医科大学肿瘤医院药学部 国家恶性肿瘤临床医学研究中心 天津市恶性肿瘤临床医学研究中心天津市肿瘤防治重点实验室,天津 3000602.中国医学科学院北京协和医学院血液病医院药物室,天津 300020
摘要：目的 构建一种可同时靶向人CD3、CD19、PD-L1的三特异性T淋巴细胞衔接器TriTE-3-19-1,并评估其介导的T淋巴细胞特异性杀伤CD19+PD-L1+淋巴瘤细胞的效果.方法 通过分子克隆技术构建慢病毒表达载体pLentiR.SV40-TriTE-3-19-1,将其瞬时转染至293T细胞,收集培养上清并纯化获得三特异性T淋巴细胞衔接器TriTE-3-19-1.采用ELISA法检测TriTE-3-19-1与Jurkat(CD3+)、Raji(CD19+)、3T3/PD-L1(PD-L1+)和Raji-PD-L1(CD19+PD-L1+)细胞的结合活性.通过LDH释放实验检测不同浓度TriTE-3-19-1介导的T淋巴细胞对靶细胞(CD19+、PD-L1+、CD19+PD-L1+细胞)的杀伤能力.通过抗PD-L1结构域封闭实验观察TriTE-3-19-1对CD19+PD-L1+细胞的杀伤能力变化,采用ELISA法检测细胞因子白细胞介素2(IL-2)、干扰素γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α).结果 慢病毒表达载体pLentiR.SV40-TriTE-3-19-1构建成功,纯化后的三特异性T淋巴细胞衔接器TriTE-3-19-1在84 kDa处以单体的形式出现预期条带.TriTE-3-19-1与Jurkat(CD3+)、Raji(CD19+)、3T3/PD-L1(PD-L1+)和Raji-PD-L1(CD19+PD-L1+)细胞的结合活性呈现典型的剂量-响应关系.随着TriTE-3-19-1浓度升高,T淋巴细胞对CD19+、PD-L1+、CD19+PD-L1+细胞的杀伤作用呈剂量依赖性增强(P均<0.05);且其介导的T淋巴细胞对CD19+PD-L1+细胞的杀伤作用显著强于CD19+细胞、PD-L1+细胞(P均<0.05).TriTE-3-19-1的抗PD-L1结构域被封闭后,其介导的T淋巴细胞对Raji-PD-L1(CD19+PD-L1+)细胞的杀伤能力减弱(P<0.05),细胞因子IL-2、IFN-γ、TNF-α表达水平也下降(P均<0.05).结论 成功构建三特异性T淋巴细胞衔接器TriTE-3-19-1,可分别与CD3+、CD19+、PD-L1+、CD19+PD-L1+细胞结合,并有效介导T淋巴细胞对CD19+PD-L1+淋巴瘤细胞的杀伤能力.
关键词：三特异性抗体T淋巴细胞衔接器三特异性T淋巴细胞衔接器特异性杀伤B细胞淋巴瘤
分类号：R318(医用一般科学)R733(造血器及淋巴系肿瘤)
资助基金：国家自然科学基金(82000197)
论文发表日期：2026-01-25
在线出版日期：2026-03-05（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 54-59 )
英文信息