pcDNA3-hNGFb真核表达载体的构建及其表达
邓兴力1
杨智勇1
董坚2
王廷华3
徐丹3
冯忠堂3
1.650032,昆明医学院第一附属医院神经外科2.650032,昆明医学院第一附属医生物治疗中心3.昆明医学院神经科学研究所
摘要：目的 构建人神经生长因子β(NGF-β)基因真核表达载体并观察其在L929细胞内的表达.方法 以RT-PCR从人脑组织总RNA中扩增NGF-β cDNA,将其克隆到真核表达载体pcDNA3中,经酶切鉴定和序列分析后,以Lipofectamine2000介导转染L929细胞,应用免疫细胞化学和western blot鉴定NGF-β在细胞内的表达.结果 RT-PCR产物为750bp的特异片段,重组质粒pcDNA3-hNGFb酶切后产生750bp和5.2kb的片段,DNA测序证实750bp片段的碱基序列与人NGF-β cDNA完全一致.将其转染L929细胞后,免疫细胞化学、western blot结果表明NGF-β及其前体proNGF-β能在真核细胞中正确表达.结论 成功构建了重组真核表达质粒pcDNA3-hNGFb,为后续的研究奠定基础.
关键词：神经生长因子真核表达重组质粒转染
分类号：R741(神经病学)
论文发表日期：2008-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 114-117 )
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