柞蚕溶菌酶真核表达系统的构建及重组蛋白纯化分析
续丹丹
温赛
王凤寰
刘怀然
韩煦
赵飞函
1.北京工商大学食品学院生物工程系,北京,1000482.北京工商大学食品学院生物工程系,北京,1000483.北京工商大学食品学院生物工程系,北京,1000484.北京工商大学食品学院生物工程系,北京,1000485.北京工商大学食品学院生物工程系,北京,1000486.北京工商大学食品学院生物工程系,北京,100048
摘要：利用甲醇营养型毕赤酵母对柞蚕溶菌酶进行高效重组表达.首先根据毕赤酵母密码子偏爱性对柞蚕溶菌酶成熟肽基因进行密码子优化,将优化后的基因序列ApLyz克隆至毕赤酵母分泌型表达载体pPICZαA中,构建重组表达载体pPICZαA-ApLyz.重组载体经电转化整合入毕赤酵母菌株GS115基因组中,并利用高质量浓度Zeocin(500 μg/mL)抗性平板筛选得到高拷贝转化子.摇瓶发酵显示,甲醇诱导72 h后,高拷贝菌株发酵液中溶菌酶活性为450 U/mL(313 U/rg总蛋白),酶活约为单拷贝菌株的3.1倍.纯化后的重组柞蚕溶菌酶分子质量约14 kDa,酶活为3 870 U/mL,比酶活为20 262 U/mg.酶学性质分析显示,重组柞蚕溶菌酶的最适反应温度为40℃,最适反应pH为4.5,具有较好的热稳定性.
关键词：柞蚕溶菌酶毕赤酵母密码子优化高拷贝筛选
分类号：S814.8(普通畜牧学)
资助基金：国家自然科学基金(21406005)北京工商大学青年教师科研启动基金(QNJJ2014-28)
论文发表日期：2016-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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