粪肠球菌活菌数EMA-qPCR快速检测方法的建立
姜芹
孙冰清
张文刚
顾欣
1.上海市动物疫病预防控制中心,上海,2011032.上海市动物疫病预防控制中心,上海,2011033.上海市动物疫病预防控制中心,上海,2011034.上海市动物疫病预防控制中心,上海,201103
摘要：利用叠氮溴乙锭(Ethidium monoazide,EMA)和实时荧光定量PCR(qPCR)的结合,建立一种快速检测粪肠球菌(Enterococcus faecalis)活菌数的方法.选择粪肠球菌保守基因sodA(超氧化物歧化酶基因)作为目的基因进行qPCR方法建立;对粪肠球菌活菌和死菌进行不同浓度的EMA处理,探索最佳EMA处理浓度.结果 显示,qPCR检测灵敏度为500 CFU/mL,在1061010 CFU/mL浓度范围内,qPCR荧光信号值与活菌浓度对数值呈线性相关(R2=0.999 9),重复试验变异系数小于5％;EMA浓度为20 μg/mL时,死菌的△Ct值(加EMA-未加EMA)最大,且对活菌扩增无显著影响.试验结果表明,EMA-qPCR方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可定向检测菌液中粪肠球菌活菌数,为粪肠球菌饲料添加剂等产品的质量控制提供技术支撑.
关键词：粪肠球菌叠氮溴乙锭实时荧光定量PCR活菌检测饲料添加剂
分类号：S816.3(普通畜牧学)
资助基金：上海市市级农口系统青年人才成长计划(2017)
论文发表日期：2019-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 64-67 )