耐热性α-半乳糖苷酶突变体的筛选及酶学性质研究
马焕1
张秀江1
胡虹1
冯菲1
解复红1
向凌云1
武艳芳2
刁文涛1
1.河南省科学院生物研究所有限责任公司,河南 郑州 450008;河南省工业酶工程技术研究中心,河南 郑州 4500082.棕榈生态城镇发展股份有限公司,河南 郑州 450000
摘要：研究旨在改造株链球菌来源的α-半乳糖苷酶基因Gal27A,获得耐热性高的突变体.在常规PCR体系中加入不同水平的MnCl2,将基因克隆至载体pGAPZαA并成功构建表达酶产物的重组质粒pGAPZαA-Gal27A.将线性化的重组质粒电转至毕赤酵母GS115,在含有100 g/L博来霉素的YPDS平板上筛选耐热性提高的突变体,通过pNPG的方法测定重组酶的酶学性质为最适温度65℃,最适pH值6.5,Ag2+、Hg2+对重组酶的酶学活性具有明显的抑制作用,Cu2+对重组酶的酶活性具有促进作用.研究表明,试验成功构建耐热α-半乳糖苷酶高效表达菌株29和54,在55℃保温10 min与同等条件下的野生型进行对比,加热前后的保留酶活比的增幅大于45%.
关键词：α-半乳糖苷酶耐温性重组质粒pGAPZαA-Gal27A保留酶活比酶学性质
分类号：S816.7(普通畜牧学)
资助基金：河南省科学院基本科研业务费项目(220605074)河南省科学院杰出人才培养项目(220405001)河南省科学院基本科研业务费项目(220605037)河南省科学院基本科研业务费项目(220605100)河南省科学院基本科研业务费项目(220605056)河南省科学院基本科研业务费项目(220605075)
论文发表日期：2023-05-15
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 80-84 )
英文信息