热纤梭菌耐热葡聚糖外切酶的克隆表达及酶学特性分析
王珊珊1
刘阳2
任艳艳2
王令3
路宏朝4
张涛5
1.陕西理工大学生物科学与工程学院,陕西汉中 723001;陕南秦巴山区生物资源综合开发协同创新中心,陕西汉中 723001;秦巴特色肉制品质量提升与安全控制陕西省高校工程研究中心,陕西汉中 7230012.陕西理工大学生物科学与工程学院,陕西汉中 7230013.陕西理工大学生物科学与工程学院,陕西汉中 723001;陕西省四主体一联合镇巴腊肉校企联合研究中心,陕西汉中 7230014.陕西理工大学生物科学与工程学院,陕西汉中 723001;秦巴特色肉制品质量提升与安全控制陕西省高校工程研究中心,陕西汉中 723001;陕西省四主体一联合镇巴腊肉校企联合研究中心,陕西汉中 7230015.陕西理工大学生物科学与工程学院,陕西汉中 723001;秦巴生物资源与生态环境省部共建国家重点实验室(培育),陕西汉中 723001;陕西省资源生物重点实验室,陕西汉中 723001
摘要：研究旨在开发耐热纤维素酶,以提高畜禽对纤维素饲料的利用率和养殖经济效益.从蛋白质信息数据库UniProt中获取热纤梭菌(Clostridium thermocellum)葡聚糖外切酶CelS的序列信息,经信号肽删除和密码子优化,利用大肠杆菌表达系统,实现了 CelS的过量表达.通过自诱导表达条件优化,有效提高了 CelS可溶表达的比例.将胞内上清液通过镍离子亲和层析和热处理分离纯化获得可溶CelS,将胞内沉淀通过洗涤、变性和复性后获得包涵体复性CelS.酶学特性检测发现,两种表达形式CelS的酶活力无显著性差异,最适反应温度均为70 ℃,最适反应pH值为5.5～6.0,对无定形纤维素(PASC)的活性最高,对结晶纤维素(Avicel)和玉米秸秆(CS)次之.CelS与海栖热袍菌(Thermotoga maritima)葡聚糖内切酶EG12B协同作用水解CS,比单独水解酶活力提高了81.8％.试验结果表明,重组CelS表现出优越的耐热性能和纤维素水解活性,为进一步开发酶制剂提供了有力支持,有利于提高纤维素饲料的利用率.
关键词：热纤梭菌葡聚糖外切酶可溶表达包涵体酶学特性
分类号：S816.7(普通畜牧学)
资助基金：陕西省教育厅重点科学研究计划项目(20JY006)
论文发表日期：2024-03-15
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 82-88 )
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