大肠杆菌Nissle 1917鞭毛蛋白FliC的结构特性及刺激Caco-2细胞作用的研究
李双
杨泽敏
廖义潇
杨颖
贵州大学动物科学学院,贵州贵阳 550025;贵州大学动物疫病研究所,贵州贵阳 550025
摘要：试验旨在分析大肠杆菌Nissle 1917鞭毛蛋白FliC(FliCEcN)的结构特征及其对Caco-2细胞的刺激作用.试验通过大肠杆菌BL21(DE3)表达FliCEcN蛋白、经NTA柱纯化FliCEcN蛋白并通过SDS-PAGE和Western-blot 验证,利用SOPMA和Alphofold2预测FliCEcN蛋白的结构模型、表面增强拉曼光谱和圆二色谱解析FliCEcN蛋白的结构,使用FliCEcN蛋白刺激Caco-2细胞后,检测免疫相关因子的分泌水平.结果显示,FliCEcN蛋白的大小为64 kDa,能够被抗His单克隆抗体特异识别;FliCEcN蛋白的氨基和羧基末端主要由α-螺旋组成,中间结构域主要由β-折叠组成.FliCEcN蛋白酰胺Ⅰ区最大吸收峰均位于1 656 cm-1处,主要二级结构为α-螺旋和β-折叠;FliCEcN的α-螺旋占比44.4％,β-折叠占比23.4％,β-转角占比13.5％,无规则卷曲占比19.0％;FliCEcN蛋白能够有效刺激Caco-2细胞分泌白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-10(IL-10);随着刺激时间延长,IL-6的分泌水平呈下降趋势,IL-10和TNF-α的分泌水平呈增加趋势.研究表明,α-螺旋和β-折叠是构成FliCEcN的主要结构,可促进其构象的正确折叠和维持其三维结构稳定,FliCEcN蛋白刺激Caco-2细胞分泌IL-6、IL-10、TNF-α的水平存在差异.
关键词：大肠杆菌Nissle 1917鞭毛蛋白表面增强拉曼光谱圆二色谱生物学活性
分类号：S816.7(普通畜牧学)
论文发表日期：2024-03-31
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 95-99 )
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