弓形体RH株抗原基因SAG1的扩增克隆及鉴定
周永安1
陈观今2
刘彦文2
罗树红2
1.山西医科大学第二医院,2.中山医科大学病原分子生物学,
摘要：目的：体外扩增弓形体主要表面抗原SAG1基因，构建pcD NA3-SAG1真核表达质粒，为研制弓形体疫苗奠定基础。方法：采用PCR技术，自行设计一对寡核酸引物(P1，P2)，从弓形体RH株基因组DNA中特异扩增出编码SAG1抗原的基因片段。扩增的目的片段经纯化后用EcoR1和HindⅢ双酶切后，克隆到真核表达质粒pcDNA3中，转化入大肠杆菌TG1，用氨苄青霉素和PCR初筛，将PCR扩增阳性的重组子分别用Sac1单酶切、EcoR1 和HindⅢ双酶切鉴定。结果成功地构建真核型表达质粒pcDNA3-SAG1，从而为进一步SAG1重组抗原的体外表达创造有利条件。结果：从RH株基因组DNA中特异扩增出编码SAG1的全基因序列，扩增目的基因片段大小与预期长度(1025bp)，相符；将分离、纯化的目的基因片段SA G1插入pcDNA3质粒HindⅢ和EcoR1位点，构建重组质粒pcDNA3-SAG1。结论：成功构建重组质粒pcDNA3-SAG1。
关键词：弓形体表面抗原SAG1鉴定
分类号：Q943(植物细胞遗传学)
论文发表日期：2001-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 249-252 )
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