新布尼亚病毒糖蛋白N端单克隆抗体的制备与鉴定
诸葛尧尧
董静
田林双
江苏财经职业技术学院粮食与食品药品学院,江苏淮安 223003
摘要：目的:制备并鉴定针对新布尼亚病毒(SFTSV)JS2012-70株N端糖蛋白(Gn)的单克隆抗体,为深入研究SFTSV的致病机制和开发检测及治疗策略提供工具.方法:通过生物信息学分析Gn蛋白的免疫原性,去除跨膜域后构建pET—28a(+)—Gn重组表达载体,利用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达Gn蛋白并通过镍离子亲和层析柱纯化.将纯化后的Gn蛋白用于免疫Balb/c雌性小鼠,采用杂交瘤技术和亚克隆技术筛选稳定分泌抗Gn蛋白单克隆抗体的细胞株,并通过蛋白质印迹法(Western blot)验证抗体的特异性.结果:Gn蛋白包含多个抗原表位,去除跨膜域后蛋白的三维结构未发生显著改变.成功表达并纯化Gn重组蛋白,浓度为0.5mg/mL.筛选出四株稳定分泌抗Gn蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株(2C3,2F6,5E9,6C8),其腹水效价均高于1∶409 600,均为IgG1/Kappa型,并能够特异性识别Gn重组蛋白及SFTSV病毒液.结论:成功制备了针对SFTSV Gn蛋白的高效价单克隆抗体,为进一步探索SFTSV的致病机制、开发检测方法和治疗策略奠定了基础.
关键词：新布尼亚病毒Gn蛋白蛋白表达纯化单克隆抗体
分类号：R378.12(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
论文发表日期：2025-04-10
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 285-290 )
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