miR-429在低氧环境中对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响

黄江; 焦旭峰; 安帅; 王居勇; 曹光磊; 沈惠良

摘要：目的探讨在低氧环境中,miR-429对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响.方法在体内、外用氯化钴(CoCl2)模拟低氧环境,采用免疫蛋白印迹(western blot,WB)检测低氧诱导因子(hypoxia inducible factor,HIF)-1α的表达验证低氧情况,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(real time-quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)观察骨折部位及细胞组织中miR-429的表达情况,同时检测MC3T3-El细胞在低氧状态下的增殖与凋亡情况;通过慢病毒转染技术在MC3T3-El细胞中过表达miR-429作为实验组,对照组为转染空载质粒细胞,采用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性检测、茜素红染色、WB等方法观察细胞中ALP活性、矿物质含量以及多种成骨标志物蛋白表达情况,对比两组MC3T3-El细胞的成骨分化;在骨折模型局部注射过表达miR-429的慢病毒载体,通过Micro-CT及qRT-PCR观察骨折愈合情况.结果在低氧环境MC3T3-E1细胞中HIF-1α高表达的同时上调了 miR-429 的表达,对MC3T3-E1细胞转染miR-429过表达病毒后,细胞中ALP的活性、细胞基质矿化水平以及成骨标志物Runt 相关转录因子 2(Runt related transcription factor 2,RUNX2)和骨钙素(osteocalcin,OC)的水平均高于对照组;体内注射过表达miR-429的慢病毒试剂后,骨折Micro-CT愈合情况、骨组织中miR-429的表达均高于对照组.结论miR-429在低氧环境中呈高表达,在诱导MC3T3-El细胞成骨分化中起到促进作用.