反转录酶在微小RNA实时荧光定量聚合酶链反应中的作用
付瑶
刘海婷
施俊超
栾天
文静
张俊
张大军
110000 辽宁沈阳,沈阳医学院药学院
摘要：目的 以微小RNA(miRNA)作为检测样本,考察影响实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测结果的关键点,并筛选出最优的检测方法.方法 采用 3 种miRNA提取方法(分别使用EasyPure? miRNA提取试剂盒、miRNA提取试剂盒、TransZol Up Plus RNA提取试剂盒)和 3 种反转录方法(分别使用TransScript?第一链cDNA反转录试剂盒、Evo M-MLV反转录试剂盒、miRNA第一链cDNA合成试剂盒)处理大鼠纹状体脑区,检测miRNA与cDNA的质量和效率,并使用常规RT-qPCR检测miRNA水平,比较不同方法所得结果.结果 3种RNA提取方法得到的miRNA质量和效率比较差异均有统计学意义,其中方法2的效果较好,但方法 1、2、3 的RT-qPCR结果比较差异无统计学意义(miR-132:25.91±9.79、25.26±10.25、27.28±7.39,miR-U6:27.98±11.25、25.98±9.78、29.62±9.65,均P＞0.05);3 种反转录方法所得实验结果比较差异有统计学意义,方法 3 所得结果明显低于方法 1、方法 2(miR-132:16.53±3.17 比 35.20±1.06、31.42±2.95,miR-U6:16.63±1.73 比 36.06±2.57、35.59±1.54,均P＜0.05),主要影响RT-qPCR的扩增效率和扩增特异性.结论 使用能高效富集约18 nt大小RNA的提取方法和在miRNA的3'末端加多聚A尾(Poly A)的反转录酶,可以得到更可靠的RT-qPCR结果.
关键词：实时荧光定量聚合酶链反应微小RNA提取方法反转录方法
论文发表日期：2023-06-15
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 193-197 )
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