干细胞因子及受体c-kit对A375细胞增殖和凋亡影响的体外研究
吴冬梅1
岑瑛2
1.四川省人民医院皮肤外科,成都,6100312.四川大学华西医院烧伤整形科
摘要：目的 利用基因工程方法建立稳定表达干细胞因子受体(SCF/c-kit)的恶性黑素瘤A375细胞株,再给予外源性SCF/c-kit,观察其对A375细胞增殖、凋亡的影响.方法 通过脂质体转染技术构建稳定表达c-kit的黑素瘤细胞株(hc-kit/A375),给予A375细胞和hc-kit/A375细胞外源性SCF,将所有的细胞分为A375组、A375-SCF组、hc-kit/A375组和hc-kit/A375-SCF组.应用MTT法及流式细胞仪分析细胞的增殖和凋亡,并应用酶联免疫吸附法(ELISA)和免疫组化方法检测肿瘤细胞血管内皮生长因子(VEGF),基质金属蛋白酶(MMP)-9及肿瘤坏死因子(TNF)-α的表达.结果 ①通过脂质体介导能将c-kit-pcDNA3.1neo重组质粒成功转染入黑素瘤细胞,建立稳定表达c-kit的黑素瘤细胞株hckit/A375,hc-kit/A375细胞中c-kit表达明显增加.②给予外源性SCF后,细胞的生长受到抑制,以培养后第5天尤为显著；细胞的凋亡率明显增加,S期比例降低,且hc-kit/A375-SCF组尤明显.③转染后细胞及加入SCF干预组VEGF、MMP-9分泌减少,而TNF-α的分泌增加.结论 通过脂质体转染和G418筛选成功构建稳定表达c-kit的A375细胞株；通过增加A375细胞中SCF/c-kit的表达能改变肿瘤细胞对VEGF、MMP-9、TNF-α的分泌,抑制肿瘤细胞的增殖,促进其凋亡.
关键词：黑素瘤转移性干细胞因子受体稳定转染A375细胞
分类号：R393(医学分子生物学)R739.5(皮肤肿瘤)
论文发表日期：2012-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 193-198 )
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