人hDlg蛋白PDZ结构域的克隆及原核表达与纯化
党育平
袁小英
李强
刘玮
1.空军总医院皮肤科,北京,1001422.空军总医院皮肤科,北京,1001423.空军总医院皮肤科,北京,1001424.空军总医院皮肤科,北京,100142
摘要：目的 探讨人果蝇肿瘤抑制蛋白hDlg的PDZ结构域在大肠杆菌中的表达与纯化.方法 从HeLa细胞中设计引物克隆含有hDlg PDZ cDNA片段后进行第二轮扩增,并连接至T载体进行测序鉴定,EcoRⅠ和Xho Ⅰ双酶切后连接至pGEX-6p-l原核表达载体.转化BL21大肠杆菌后37℃诱导表达.结果 测序和双酶切鉴定hDlg的PDZ结构域被成功克隆至pGEX-6p-1原核表达载体.37℃诱导表达后,大部分GST-PDZ融合蛋白以包涵体的形式存在,部分存在于细菌裂解上清液中.16℃诱导表达后,无法检测到目的蛋白的表达.通过GST-beads结合的方式对细菌裂解液进行纯化,可溶性GST-PDZ的蛋白量可以显著提高.结论 通过GST-PDZ诱导表达,再通过GST-beads结合纯化的方式成功表达可溶性的hHlg PDZ结构域.
关键词：人乳头瘤病毒hDlgPDZ结构域原核表达
分类号：R752(皮肤病学与性病学)
论文发表日期：2015-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 415-418 )
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