优化PCR条件扩增人IL-10 cDNA及其原核表达载体构建
李明才
何韶衡
陶爱林
1.515041,汕头大学医学院变态反应学与炎症学研究所2.515041,汕头大学医学院变态反应学与炎症学研究所3.515041,汕头大学医学院变态反应学与炎症学研究所
摘要：目的:探讨PCR扩增人IL-10基因片段的最佳反应条件并构建人IL-10原核表达载体.方法:运用降落PCR扩增5'端GC含量高的人IL-10基因片段,主要对退火温度和热启动等因素进行优化选择;载体和PCR产物经拓扑TA克隆技术连接,常规方法转化、筛选阳性重组质粒.结果:PCR反应的最佳退火温度为68.5℃,此时扩增出的DNA片段大小符合预期设想,并通过菌落PCR和DNA测序得到证实.结论:在上述条件下获得的PCR产物纯度高、非特异性产物少,成功地构建了人IL-10原核表达载体.并提示降落PCR是一种潜在的一步找到最佳扩增条件的方法.
关键词：聚合酶链反应白细胞介素10热启动退火温度
分类号：R394(医学遗传学)
论文发表日期：2003-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 1195-1197 )