人白细胞介素-29cDNA克隆及其在大肠杆菌系统的表达
张胜权
鲁云霞
罗欣
徐从贞
陈兵
1.230032,合肥市,安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室2.230032,合肥市,安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室3.230032,合肥市,安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室4.230032,合肥市,安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室5.230032,合肥市,安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室
摘要：目的:克隆人细胞因子 IL- 29全长 cDNA及其在大肠杆菌中表达,制备抗 IL- 29多克隆抗体.方法:分离外周血单核细胞; vsv感染后,提取总 RNA,通过一步 RT- PCR获得 IL- 29全长 cDNA. DNA测序正确后,将 IL- 29cDNA的编码框序列构建到原核表达载体 pET28a(+ )中.卡那霉素平板筛选及 PCR鉴定,挑出阳性克隆进行扩增、转化大肠杆菌进行 IPTG诱导表达. SDS- PAGE、 Western blotting鉴定,亲和层析分离纯化得到 Mr为 23 000组氨酸标签重组人 IL- 29融合蛋白.纯化的 IL- 29免疫家兔制备抗 IL- 29多克隆抗体.结果:成功获得人 IL- 29全长 cDNA,并以包涵体形式表达于大肠杆菌中.免疫家兔后获得特异抗 IL- 29的多克隆抗体.结论:获得 rhIL- 29细胞因子及其多克隆抗体,为其进一步研究及应用奠定基础.
关键词：白细胞介素类克隆分子包涵体多克隆抗体
分类号：R3(基础医学)
资助基金：安徽省教育厅自然科学基金(2002KJ153)
论文发表日期：2005-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 5-7 )
英文信息