人survivin蛋白的表达、纯化与单克隆抗体制备
杨形涛
张勇
黄立军
李存孝
高杰
周勇
范清宇
马保安
1.710038,西安市,第四军医大学唐都医院全军骨科中心2.710038,西安市,第四军医大学唐都医院全军骨科中心3.710038,西安市,第四军医大学唐都医院全军骨科中心4.710038,西安市,第四军医大学唐都医院全军骨科中心5.710038,西安市,第四军医大学唐都医院全军骨科中心6.710038,西安市,第四军医大学唐都医院全军骨科中心7.710038,西安市,第四军医大学唐都医院全军骨科中心8.710038,西安市,第四军医大学唐都医院全军骨科中心
摘要：目的:表达人survivin重组蛋白并制备单克隆抗体.方法:表达含有survivin基因的重组质粒pRSETB-survivin,表达人survivin重组蛋白,以此为抗原,常规方法免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与NS21细胞融合,得稳定分泌survivin mAb的杂交瘤细胞株,ELISA检测mAb的相对亲和力,Western blot检测mAb的特异性.间接免疫荧光观察骨肉瘤细胞中survivin的表达情况.结果:重组载体pRSETB-survivin转化入大肠杆菌BL21中表达所得蛋白经Western blot验证为目的蛋白.筛选出2株能稳定分泌特异性抗人survivin的mAb杂交瘤细胞株,免疫球蛋白亚类均为IgG类;单克隆抗体的亲和常数为S1 1.52×10-9mol/L,S2 2.31×10-9mol/L.Western blot结果显示,2株单抗识别相对分子质量为20 000的survivin单一条带,并发现在骨肉瘤细胞中survivin主要表达在胞浆内.结论:成功地表达出人survivin重组蛋白,制备出抗人survivin mAb,为进一步用于survivin的免疫学检测及骨肉瘤生物学治疗奠定了基础.
关键词：存活素基因表达抗体单克隆
分类号：R3(基础医学)
论文发表日期：2006-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 2577-2579 )
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