结核菌抗原基因Rv3881c在大肠杆菌中的高效表达分析
李邦印1
李大伟1
王臻2
吴雪琼1
王仲元1
1.100091 北京市,解放军总医院第二附属医院结核病研究所2.330045 南昌市,江西农业大学动科院
摘要：目的:从结核分枝杆菌基因组克隆Rv3881c基因并重组入pET24b载体,在大肠杆菌中进行融合表达,重组蛋白经纯化后通过Western blot分析初步鉴定其抗原性和特异性.方法:提取H37Rv标准株的基因组DNA,以基因组DNA为模板PCR扩增出Rv3881c基因,连接到pGEMT上,经过筛选鉴定后,将重组子测序;将测序正确的基因双酶切后连接到pET24b载体上,筛选得到重组载体pET24b-48;在BL21菌株中优化表达并采用金属鍪合层析方法纯化蛋白;选取6例结核病阳性临床血清标本和6例健康人血清标本进行Western blot分析.结果:发现从保存的H37Rv菌株克隆得到了读码框完全正确的Rv3881c基因,它在大肠杆菌中可以高效表达,表达量约占细菌总蛋白的20%以上.重组蛋白不与健康人血清反应,可与结核标本血清有较强的免疫印迹反应.结论:重组Rv3881c具有较好的特异性,该抗原有潜力成为检测结核的有效抗原组分之一.
关键词：大肠杆菌重组融合蛋白质类Rv3881cH37Rv
分类号：R3(基础医学)
资助基金：国家自然科学基金(30471528)国家自然科学基金(30471628)
论文发表日期：2007-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 1605-1607 )
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