改进酶消化法培养SD大鼠成骨细胞及其鉴定
王双利1
查振刚1
刘宁1
杨淑野1
吴昊1
姚平2
张嘉晴3
1.暨南大学附属第一医院骨科,广州市,5106322.暨南大学医学院生理教研室, 广州市,5106323.暨南大学医学院生化教研室, 广州市,510632
摘要：目的:改进SD大鼠成骨细胞的体外分离、培养方法并进行功能鉴定.方法:将新生SD大鼠处死,无菌条件下取出颅骨,剔净骨膜后剪成1 mm×1 mm×1 mm大小组织块.组织块经0.25%胰蛋白酶消化20min,继以0.1%Ⅱ型胶原酶消化60min,收集上清离心,所得成骨细胞接种于培养瓶中并行"多次贴壁法"纯化.观察细胞形态学,选用碱性磷酸酶Gomori钙钴法染色,钙结节茜素红法染色及I型胶原免疫组化染色等方法进行鉴定.结果:培养的细胞具有典型的成骨细胞形态特征,在体外培养时可维持其在体内的功能,即合成碱性磷酸酶、形成矿化结节,I型胶原染色阳性.结论:用改进后的酶消化法分离、培养SD大鼠成骨细胞,更能减少胰蛋白酶在消化过程中对细胞造成的损伤,所获成骨细胞量多、纯度高,操作简易可行,可作为骨组织工程种子细胞常规的培养方法.
关键词：成骨细胞大鼠改进酶消化法
分类号：R3(基础医学)
资助基金：国家高技术研究发展计划（863计划）(2007AA09Z4400)广东省医学科学技术研究项目(B2006089)广东省科技攻关计划(2006860501009)广州市科技攻关计划(2006Z3-E5211)
论文发表日期：2008-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 915-918 )
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