SD大鼠骨髓间充质干细胞分离培养及其生物学特性鉴定
闫磊
李思源
慕晓玲
1.新疆石河子大学"新疆地方与民族高发病"省部共建教育部重点实验室-组胚教研室,8320022.新疆石河子大学"新疆地方与民族高发病"省部共建教育部重点实验室-组胚教研室,8320023.新疆石河子大学"新疆地方与民族高发病"省部共建教育部重点实验室-组胚教研室,832002
摘要：目的:探讨并优化大鼠骨髓间充质干细胞(rat bone marrow mesenchymal stem cells.rBMSCs)体外分离培养方法,鉴定其生物学特性,为BMSCs应用奠定技术基础.方法:无菌条件下分离SD大鼠股、胫骨,用无血清培养液(α-MEM培养基、100 U/mL青霉素,100 U/mL链霉素)冲出骨髓,采用密度梯度离心法结合贴壁筛选法分离纯化rBMSCs,通过传代培养,扩增rBMSCs.倒置光学显微镜下观察细胞形态及生长特征,绘制细胞生长曲线.免疫细胞化学染色测定rBMSCs表面标志,成骨诱导试剂盒检测rBMSCs向成骨分化的潜能.结果:镜下rBMSCs呈梭形、多角形成纤维细胞样形态,大小均一,漩涡状生长.生长曲线分析rBMSCs贴壁2d基本无增殖,处于潜伏期,时数增殖期为3～6 d.第7天后进入平台期,细胞出现接触抑制现象.rBMSCs表面标志显示第3代rBMSCs纯度可达99%以上.其细胞表型CD44呈阳性表达,CD34呈阴性表达.向成骨诱导rBMSCs 10 d后细胞表现成骨细胞特性,碱性磷酸酶活性明显增高.结论:本实验从细胞取材、细胞接种密度、条件培养基到细胞微环境等各方面的方法进行了优化,建立了一种理想的体外分离扩增rBMSCs的培养体系.实验结果表明所分离培养的rBMSCs纯度高、扩增迅速、生物学形状稳定,可为组织工程提供比较理想的种子细胞,为进一步研究BMSCs生物学行为及临床研究和应用奠定了坚实的基础.
关键词：干细胞细胞培养生物学特性
资助基金：国家自然科学基金(30360095)新疆兵团科技局医药专项科技攻关计划(05GG40)
论文发表日期：2008-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 2945-2947 )
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