真核表达载体pIRES-EGFP-PDGF-B的构建及在293T细胞中的表达
陈松建
徐锡金
霍霞
张宝
梁晓
陈刚建
1.汕头大学医学院中心实验室,5150412.汕头大学医学院中心实验室,5150413.汕头大学医学院中心实验室,5150414.汕头大学医学院中心实验室,5150415.汕头大学医学院中心实验室,5150416.汕头大学医学院中心实验室,515041
摘要：目的:构建人基因血小板衍化生长因子B(PDGF-B)真核表达载体pIRES-EGFP-PDGF-B,并在293T细胞中进行瞬间表达.方法:采用PCR方法从购自美国典型培养物保藏中心含有PDGF-B基因全长cDAN序列的质粒中扩增出PDGF-B的cDAN片段,并与真核表达载体pIRES-EGFP连接双酶切鉴定,最后采用Lipofectamine 2000将重组质粒转入293T细胞中,利用荧光显微镜和Western blot进行表达鉴定.结果:真核表达栽体pIRES-EGFP-PDGF-B被成功构建,双酶切鉴定正确,载体能在293T细胞内正确地表达成熟的PDGF-B蛋白,并可分泌到细胞外.结论:成功构建了PDGF-B真核表达载体,为进一步利用PDGF-B对脊髓损伤进行基因治疗奠定基础. 含有PDGF-B基因全长cDAN序列的质粒中扩增出PDGF-B的cDAN片段,并与真核表达裁体pIRES-EGFP连接双酶切鉴定,最后采用Lipofectamine 2000将重组质粒转入293T细胞中,利用荧光显微镜和Western blot进行表达鉴定.结果:真核表达栽体pIRES-EGFP-PDGF-B被成功构建,双酶切鉴定 确,载体能在293T细胞内正确地表达成熟的PDGF
关键词：脊髓损伤血小板衍化生长因子B真核表达
资助基金：广东省科技计划(2007B031515015)
论文发表日期：2008-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 3813-3815 )
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