携带人血管内皮生长因子165基因的复制缺陷型腺病毒载体的构建和鉴定
周炜1
冯进波2
王旭平2
刘春喜2
姜虹2
王荣2
丁士芳3
1.山东大学齐鲁医院放射科,济南市,2500122.教育部和卫生部心血管重构和功能研究重点实验室,济南市,2500123.山东大学齐鲁医院ICU,济南市,250012
摘要：目的:构建携带人血管内皮生长因子(VEGF)165基因的重组腺病毒载体.方法:应用EcoR Ⅰ和Xba Ⅰ酶切质粒PDC-VEGF和PDC315,连接DNA目的片段后转化大肠杆菌DH5a构建重组质粒PDC315-VEGF,对重组质粒进行酶切分析和测序鉴定.通过脂质体将质粒PDC315-VEGF与质粒pBHGE3共转染293细胞获取重组腺病毒,以重组腺病毒DNA为模板,PCR鉴定构建的重组腺病毒.扩增、浓缩纯化重组腺病毒,微量滴定法测定腺病毒滴度.结果:通过连接反应构建重组质粒PDC315-VEGF,酶切分析和测序证明构建正确.经细胞内同源重组构建携带人VEGF165基因的重组腺病毒,PCR扩增421 bp VEGF165片段,证实VEGF165基因成功克隆到复制缺陷型腺病毒载体,腺病毒滴度为5.0×109pfu/mL.结论:通过双质粒细胞同源重组,生产携带人VEGF165基因的重组腺病毒,为动物试验奠定基础.
关键词：血管内皮生长因子类腺病毒载体
资助基金：国家自然科学基金(30470701,30470702,30570747,30670873)国家重点基础研究发展计划（973计划）(2006CB503803)
论文发表日期：2009-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 342-344 )
英文信息